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　　Elisa操作—加顯A顯B 過程

　　ELISA試劑盒是一種常用于生物分子檢測的實驗工具,，中文簡稱酶聯(lián)免疫吸附實驗,。ELISA試劑盒通常包括特定抗體、酶標(biāo)記的二抗,、底物等多種生化試劑,，可用于檢測血清、尿液,、唾液,、細(xì)胞、組織等生物樣品中的蛋白質(zhì),、肽,、荷爾蒙、抗體,、細(xì)胞因子,、病毒等生物分子。該技術(shù)廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué),、生物學(xué),、環(huán)境科學(xué)等領(lǐng)域。

　　產(chǎn)品特點

　　1,、高效,、靈敏、特異的抗體;

　　2,、穩(wěn)定的重復(fù)性和可靠性;

　　3,、吸附性能好，空白值低,，孔底透明度高的固相載體;

　　4,、適用血清、血漿,、組織勻漿液,、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、尿液等等多種標(biāo)本類型;

　　5,、節(jié)省實驗經(jīng)費,。

　　ELISA操作步驟

　　1,、包被：用PH9.6的CBS包被液稀釋包被抗原至5μg/ml，酶標(biāo)板中每孔加入50μl,，室溫,、4℃或37℃過夜包被。

　　2,、洗滌：棄包被液(用力拍干,，再用無塵紙吸干)，用PH7.2-7.4的1×PBST洗滌液洗板3次(每孔均要加滿),，每次3min~5min,。

　　3、封閉：每孔加封閉液(1%BSA)250μl,，37℃封閉2h,。

　　4、洗滌：用1×PBST洗滌液洗板3次,，每次3min~5min,。

　　5、結(jié)合一抗：用1×PBST緩沖液1∶1000稀釋被檢血清,，每孔100μl,，要設(shè)立陰性對照，37℃孵育1.5h,。

　　6,、洗滌：同上。

　　7,、結(jié)合酶標(biāo)二抗：每孔加1×PBST緩沖液1000倍稀釋的酶標(biāo)二抗羊抗鼠IgG-HRP(稀釋倍數(shù)根據(jù)產(chǎn)品不同有所不同,，可按說明書進行)50μl，37℃孵育1h,。

　　8,、洗滌：同上。

　　9,、顯色：每孔加底物溶液(TMB)50μl，置室溫避光顯色10min,。

　　10,、待顯色后，每孔加入50μl終止液(2mol/L H2SO4)終止反應(yīng),。使用酶標(biāo)儀讀取450nm的OD值,，以確定血清抗體水平。