大鼠蛋白激酶B(PKB)ELISA試劑盒免費(fèi)代測本生生物公司供應(yīng)：ELISA試劑盒,動物血清,熒光定量PCR耗材,移液器吸嘴,微量離心管,進(jìn)口凍存管,細(xì)胞培養(yǎng)皿,培養(yǎng)板,培養(yǎng)瓶,進(jìn)口吸頭,儀器及手套,色譜耗材,針頭過濾器。

本試劑盒僅供研究使用

檢測范圍： 96T

使用目的：

本試劑盒用于測定大鼠血清,、血漿及相關(guān)液體樣本中蛋白激酶B(PKB)含量,。

實(shí)驗(yàn)原理

本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中大鼠蛋白激酶B(PKB)水平。用純化的蛋白激酶B(PKB)抗體包被微孔板,，制成固相抗體,，往包被單抗的微孔中依次加蛋白激酶B(PKB)，再與HRP 標(biāo)記的蛋白激酶B(PKB)抗體結(jié)合,，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB 顯色。TMB 在HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的蛋白激酶B(PKB)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中蛋白激酶B(PKB)濃度,。

試劑盒組成：

1 30 倍濃縮洗滌液 20ml×1 瓶 ; 2 酶標(biāo)試劑 6ml×1 瓶

3 酶標(biāo)包被板 12 孔×8 條 ; 4 樣品稀釋液 6ml×1 瓶

5 顯色劑A 液 6ml×1 瓶 ; 6 顯色劑B 液 6ml×1/瓶

7 終止液 6ml×1 瓶; 8 標(biāo)準(zhǔn)品(48ng/ml) 0.5ml×1 瓶

9 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 1.5ml×1 瓶; 10 說明書 1 份

11 封板膜 2 張; 12 密封袋 1 個

標(biāo)本要求

1. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn),。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融

2. 不能檢測含 NaN3 的樣品,，因 NaN3 抑制胎盤核糖核酸抑止劑(HPRI)活性,。

操作步驟

1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋,。

60 ng/L5 號標(biāo)準(zhǔn)品150µl 的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

30 ng/L4 號標(biāo)準(zhǔn)品150µl 的 5 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

15 ng/L3 號標(biāo)準(zhǔn)品150µl 的 4 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

7.5 ng/L2 號標(biāo)準(zhǔn)品150µl 的 3 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

3.75 ng/L1 號標(biāo)準(zhǔn)品150µl 的 2 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

2. 加樣：分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,，其余各步操作相同),、標(biāo)準(zhǔn)孔,、待測樣品孔,。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣 50µl,，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl，

然后再加待測樣品 10µl(樣品終稀釋度為 5 倍),。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡

量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻,。

3. 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘,。

4. 配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用

5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體,，甩干,，每孔加滿洗滌液,，靜置 30 秒后棄去，如此重復(fù) 5 次,，拍干,。

6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50µl，空白孔除外,。

7. 溫育：操作同 3,。

8. 洗滌：操作同 5。

9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50µl,，再加入顯色劑 B50µl,，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色

15 分鐘.

10. 終止：每孔加終止液 50µl,，終止反應(yīng)(此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色),。

11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值),。 測定應(yīng)在加終止液后 15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行,。

大鼠蛋白激酶B(PKB)ELISA試劑盒免費(fèi)代測

操作程序總結(jié)：

計算:

以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD 值為縱坐標(biāo),，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,，根據(jù)樣品的OD 值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與 OD 值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的 OD 值代入方程式,，計算出樣品濃度,，再乘以稀釋倍數(shù)，

即為樣品的實(shí)際濃度,。

大鼠蛋白激酶B(PKB)ELISA檢測試劑盒注意事項

1. 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存,。

2. 濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶,，洗滌時不影響結(jié)果,。

3. 各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性,，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時間控制在 5 分鐘內(nèi),，如標(biāo)本數(shù)量多,，推薦使用排槍加樣。

4. 請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線,，做復(fù)孔,。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本 OD 值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔孔的 OD 值)，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n 倍)后再測定,，計算時請后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5),。

5. 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染,。6.底物請避光保存,。

7. 嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).

8. 所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理,。

9. 本試劑不同批號組分不得混用。

10. 如與英文說明書有異,，以英文說明書為準(zhǔn)。

保存條件及有效期

1. 試劑盒保存：;2-8℃,。

2. 有效期：6 個月

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