豬肝素結(jié)合性表皮生長(zhǎng)因子(HB-EGF)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)使用說(shuō)明書

　　BS-8208 豬肝素結(jié)合性表皮生長(zhǎng)因子(HB-EGF)ELISA試劑盒

　　以下是天津本生豬肝素結(jié)合性表皮生長(zhǎng)因子(HB-EGF)ELISA試劑盒的實(shí)驗(yàn)使用說(shuō)明綜合整理：

　　一,、實(shí)驗(yàn)原理

　　采用雙抗體夾心法(或一步夾心法)檢測(cè)樣本中的HB-EGF濃度,。通過(guò)包被抗體捕獲目標(biāo)蛋白,，再結(jié)合酶標(biāo)抗體形成復(fù)合物,，經(jīng)TMB顯色后測(cè)定OD值，濃度與吸光度呈正相關(guān),。

　　二,、試劑盒組成

　　主要成分?

　　預(yù)包被微孔板

　　標(biāo)準(zhǔn)品(通常含凍干粉，需用稀釋液重構(gòu))

　　酶標(biāo)抗體,、顯色劑(A/B液),、終止液

　　濃縮洗滌液(需稀釋使用)

　　保存條件?

　　未開封試劑需2-8℃保存，標(biāo)準(zhǔn)品及樣本稀釋后建議分裝凍存(-20℃以下),，避免反復(fù)凍融,。

　　三、樣本處理

　　血清/血漿?：離心去除雜質(zhì)(1000×g,，15-20分鐘),，溶血樣本不可用。

　　組織勻漿?：需用PBS沖洗后勻漿,，離心取上清(5000×g,，5-10分鐘)。

　　細(xì)胞培養(yǎng)上清?：直接離心(1000×g,，20分鐘)后檢測(cè),。

　　四、操作步驟

　　標(biāo)準(zhǔn)品稀釋?：按說(shuō)明書梯度稀釋(通常為2倍系列稀釋),。

　　加樣與溫育?：

　　每孔加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣本100μL,，37℃孵育1-2小時(shí)。

　　洗滌?：使用稀釋后的洗滌液洗板4-6次,。

　　顯色與終止?：

　　加入TMB顯色液,，避光反應(yīng)10-15分鐘，后加終止液,。

　　檢測(cè)?：450nm波長(zhǎng)讀取OD值,，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算濃度。

　　五,、注意事項(xiàng)

　　避免試劑交叉污染,，不同批號(hào)組件勿混用。

　　顯色時(shí)間需嚴(yán)格控制,，強(qiáng)陽(yáng)性樣本可能需進(jìn)一步稀釋,。

　　實(shí)驗(yàn)前需平衡所有試劑至室溫(約30分鐘)。

　　如需具體參數(shù)(如標(biāo)準(zhǔn)品初始濃度,、靈敏度等),，請(qǐng)參考試劑盒配套說(shuō)明書或咨詢技術(shù)老師。

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