以下是關(guān)于小鼠CXC趨化因子受體3(CXCR3)ELISA試劑盒的實(shí)驗(yàn)使用說(shuō)明綜合指南：

　　BS-2016  小鼠CXC趨化因子受體3(CXCR3)ELISA試劑盒

　　一,、試劑盒組成?

　　預(yù)包被酶標(biāo)板?：96孔或48孔規(guī)格,，含抗小鼠CXCR3單抗

　　標(biāo)準(zhǔn)品?：通常為80ng/瓶或240ng/L濃度,，提供2-5瓶

　　檢測(cè)試劑?：

　　酶標(biāo)抗體工作液(HRP標(biāo)記)

　　顯色液(TMB A/B液)

　　終止液(硫酸溶液)

　　輔助溶液?：

　　10×標(biāo)本稀釋液,、20×濃縮洗滌液

　　封板膜,、密封袋等耗材

　　二,、樣本處理?

　　樣本類型?：血清、血漿,、細(xì)胞上清液或組織勻漿

　　處理方法?：

　　血清/血漿?：1000-3000×g離心10-30分鐘,，去除顆粒或纖維蛋白

　　細(xì)胞上清?：離心去除細(xì)胞碎片

　　組織勻漿?：生理鹽水勻漿后離心取上清

　　保存條件?：-20℃分裝凍存,，避免反復(fù)凍融

　　三,、實(shí)驗(yàn)步驟?(雙抗體夾心法)

　　標(biāo)準(zhǔn)品稀釋?：用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液配制梯度濃度(如0-400 ng/L)

　　加樣?：

　　每孔加入100μL標(biāo)準(zhǔn)品或樣本，37℃孵育1-2小時(shí)

　　洗滌?：甩干孔內(nèi)液體,，加滿洗滌液靜置30秒,，重復(fù)3-5次

　　加酶標(biāo)抗體?：每孔加入100μL HRP標(biāo)記抗體，37℃孵育30-60分鐘

　　顯色?：加入TMB底物避光反應(yīng)15-30分鐘

　　終止與檢測(cè)?：

　　加終止液(50μL/孔)后立即測(cè)定450nm OD值

　　根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣本濃度

　　四,、注意事項(xiàng)?

　　溫度控制?：

　　試劑使用前需室溫平衡20分鐘,，避免低溫影響靈敏度

　　顯色反應(yīng)需嚴(yán)格避光

　　操作規(guī)范?：

　　避免孔間交叉污染，使用獨(dú)立槍頭

　　邊緣孔易出現(xiàn)“邊緣效應(yīng)",，建議棄用外周孔

　　數(shù)據(jù)有效性?：

　　標(biāo)準(zhǔn)曲線R2應(yīng)≥0.99,，復(fù)孔CV值<15%

　　五,、常見(jiàn)問(wèn)題?

　　靈敏度下降?：可能因試劑未恢復(fù)至室溫或超過(guò)有效期

　　背景過(guò)高?：洗滌不或樣本溶血導(dǎo)致

　　如需完整說(shuō)明書(shū)或技術(shù)支持,，建議聯(lián)系廠商獲取最新版本。

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