以下是關(guān)于人血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)ELISA試劑盒的實(shí)驗(yàn)使用說明綜合指南：

　　BS-10001  人血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)ELISA試劑盒

　　一,、實(shí)驗(yàn)原理

　　采用雙抗體夾心法,，通過預(yù)包被在酶標(biāo)板上的抗VEGF抗體捕獲樣本中的VEGF,，再與HRP標(biāo)記的檢測抗體形成復(fù)合物,，經(jīng)TMB顯色后測定OD值,，濃度與顏色深淺成正比,。

　　二,、試劑盒組成

　　核心組分?：預(yù)包被酶標(biāo)板(96孔)、標(biāo)準(zhǔn)品(40ng/瓶),、HRP標(biāo)記抗體,、TMB底物、終止液

　　輔助溶液?：20×濃縮洗滌液(需1:20稀釋),、10×標(biāo)本稀釋液(需1:10稀釋)

　　三,、樣本處理

　　血清/血漿?：3000rpm離心10-30分鐘，避免反復(fù)凍融

　　細(xì)胞上清?：離心去除顆粒物,，分裝保存于-20℃

　　組織勻漿?：生理鹽水搗碎后離心取上清

　　四,、標(biāo)準(zhǔn)品配制

　　標(biāo)準(zhǔn)品用1ml蒸餾水復(fù)溶(40ng/ml)

　　梯度稀釋：依次進(jìn)行對(duì)倍稀釋(62.5-2000pg/mL)

　　五、實(shí)驗(yàn)步驟

　　加樣?：標(biāo)準(zhǔn)品/樣本各100μL，37℃溫育2小時(shí)

　　洗滌?：手工洗板需浸泡1-2分鐘,，重復(fù)3-5次,，拍干

　　顯色?：

　　加TMB底物90μL，避光反應(yīng)15-25分鐘

　　終止反應(yīng)后立即測定450nm OD值

　　六,、注意事項(xiàng)

　　保存條件?：試劑盒2-8℃保存,，使用前室溫平衡60分鐘

　　交叉污染?：使用一次性吸頭，避免金屬接觸終止液

　　質(zhì)量控制?：板內(nèi)變異系數(shù)<10%,，板間<15%

　　七,、結(jié)果計(jì)算

　　以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)繪制曲線,，通過回歸方程計(jì)算樣本濃度,。

　　注：本試劑盒僅限科研使用，不可用于臨床診斷,。

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