以下是?大鼠骨特異性堿性磷酸酶(ALP)ELISA試劑盒?的實驗使用說明書,，綜合操作流程,、注意事項及技術要點：

　　BS-3487  大鼠骨特異性堿性磷酸酶(ALP)ELISA試劑盒

　　一,、實驗原理?

　　采用?雙抗體夾心法?：

　　包被微孔板的大鼠ALP捕獲抗體與樣本中的ALP結合?,。

　　加入HRP標記的檢測抗體,，形成“抗體-抗原-酶標抗體"復合物?,。

　　TMB顯色，顏色深淺與ALP濃度正相關,，450nm測OD值?,。

　　二、樣本處理?

　　血清/血漿?：

　　采集后3000rpm離心10-20分鐘,，避免溶血?,。

　　抗凝劑可選EDTA、肝素或檸檬酸鹽?,。

　　組織勻漿?：

　　加入PBS勻漿,，3000rpm離心10分鐘取上清?。

　　細胞上清液?：

　　離心去除顆粒,，避免反復凍融?,。

　　保存?：

　　短期存于2-8℃，長期需-20℃保存,，避免多次凍融?,。

　　三、操作步驟?

　　標準品稀釋?：

　　按說明書梯度稀釋(如40IU/L→2.5IU/L)?,。

　　加樣?：

　　空白孔不加樣,，標準孔加50μl標準品，樣本孔先加40μl稀釋液+10μl樣本(5倍稀釋)?,。

　　溫育?：

　　37℃孵育30分鐘,，封板膜密封?。

　　洗滌?：

　　用稀釋后的洗滌液洗板5次,，拍干?,。

　　加酶標抗體?：

　　每孔50μl(空白孔除外)，37℃復育30分鐘?,。

　　顯色與終止?：

　　依次加入顯色劑A/B各50μl,，避光顯色15分鐘，終止液50μl終止反應?,。

　　檢測?：

　　450nm測OD值,，15分鐘內(nèi)完成?,。

　　四、注意事項?

　　試劑準備?：

　　使用前平衡至室溫(15-30分鐘),，濃縮洗滌液需37℃助溶?,。

　　加樣精度?：

　　使用校準加樣器，避免孔壁接觸,，5分鐘內(nèi)完成加樣?,。

　　質(zhì)量控制?：

　　每次實驗需做標準曲線及復孔，樣本OD值超標準曲線時需稀釋?,。

　　干擾因素?：

　　避免使用NaN3(抑制HRP活性)或高脂樣本?,。

　　五、結果計算?

　　以標準品濃度為橫坐標,、OD值為縱坐標繪制曲線,，擬合方程計算樣本ALP濃度?。

　　以上操作需嚴格遵循試劑盒說明書,，不同批次可能存在差異?,。

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