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大鼠I型前膠原羧基端肽(PICP)ELISA試劑盒的實(shí)驗(yàn)使用說明書如下:
BS-3496 大鼠I型前膠原羧基端肽(PICP)elisa試劑盒
1. ?實(shí)驗(yàn)原理?
本試劑盒采用雙抗體夾心法測定樣本中大鼠I型前膠原羧基端肽(PICP)的含量,。首先用純化的PICP抗體包被微孔板,,形成固相抗體,。隨后加入樣本或標(biāo)準(zhǔn)品,與HRP標(biāo)記的PICP抗體結(jié)合,,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,。洗滌后加入底物TMB顯色,顏色的深淺與樣本中PICP濃度呈正相關(guān),,通過酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值)并計算濃度?,。
2. ?試劑盒組成?
酶標(biāo)板(預(yù)包被):96孔
標(biāo)準(zhǔn)品:400ng/ml
酶標(biāo)抗體工作液:12ml
標(biāo)本稀釋液:12ml
濃縮洗滌液:50ml
TMB底物:12ml
終止液:12ml
第一抗體工作液:12ml?。
3. ?樣本處理?
血清/血漿?:采集后1000×g離心10分鐘,,分離上清液,。
細(xì)胞培養(yǎng)上清液?:3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒。
組織勻漿?:加入生理鹽水搗碎,,3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清?,。
4. ?實(shí)驗(yàn)步驟?
加樣?:每孔加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣本100μl,37℃孵育120分鐘?,。
洗滌?:用洗滌液充分洗滌4-6次,,濾紙印干?。
加入第一抗體?:每孔加入第一抗體工作液100μl,37℃孵育60分鐘?,。
顯色?:每孔加入TMB底物100μl,,避光孵育15-30分鐘?。
終止反應(yīng)?:每孔加入終止液50μl,,立即測定OD值?,。
5. ?結(jié)果計算?
以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,,通過曲線計算樣本中PICP濃度?,。
6. ?注意事項(xiàng)?
試劑盒需在2-8℃保存,避免反復(fù)凍融?,。
實(shí)驗(yàn)過程中需使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管?,。
顯色反應(yīng)需避光進(jìn)行,終止后立即測定?,。
7. ?檢測范圍與靈敏度?
檢測范圍:1.25-80ng/mL
檢測限:0.49ng/mL?,。
以上為大鼠I型前膠原羧基端肽(PICP)ELISA試劑盒的詳細(xì)使用說明,適用于科研實(shí)驗(yàn)中的定量檢測?,。
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