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　　?大鼠骨鈣素/骨谷氨酸蛋白(OT/BGP)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)使用說(shuō)明書(shū)主要包括試劑的保存,、試劑的準(zhǔn)備,、操作流程及注意事項(xiàng)等部分?。

　　試劑的保存

　　試劑盒應(yīng)保存在-20℃(較長(zhǎng)時(shí)間不用時(shí))或2-8℃(頻繁使用時(shí))?,。

　　濃洗滌液低溫保存時(shí)可能會(huì)有鹽析出,，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶?。

　　試劑的準(zhǔn)備

　　試劑應(yīng)按說(shuō)明儲(chǔ)存，用前恢復(fù)到室溫,。稀釋后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,，不可保存?3。

　　使用一次性的吸頭以免交叉污染,，吸取終止液和底物A,、B液時(shí)，避免使用帶金屬部分的加樣器?,。

　　用干凈的塑料容器配置洗滌液,，用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品?。

　　操作流程

　　待測(cè)樣品孔中每孔加入待測(cè)樣品100μl,，每種樣品設(shè)3個(gè)平行孔;設(shè)兩個(gè)陰性對(duì)照孔,，每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl;另設(shè)一個(gè)空白對(duì)照孔，加入純細(xì)胞裂解液100μl?,。

　　酶標(biāo)板置4℃,，包被過(guò)夜?1。

　　洗板：吸干孔內(nèi)反應(yīng)液,，用洗滌液洗滌3-4次?,。

　　陰性對(duì)照孔每孔加入PBS 50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的抗體工作液50μl(具體抗體根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求選擇)?,。

　　酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),，孵育60min?。

　　再次洗板?,。

　　加入底物,，反應(yīng)后加終止液，用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中大鼠骨鈣素/骨谷氨酸蛋白(OT/BGP)濃度?,。

　　注意事項(xiàng)

　　實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存,，以免變質(zhì)?,。

　　不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好，保質(zhì)前使用,。不同批號(hào)的試劑不要混用?3,。

　　洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水?,。

　　底物A易揮發(fā),，避免長(zhǎng)時(shí)間打開(kāi)蓋子;底物B對(duì)光敏感，避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下,，且有毒,，實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值?,。

　　加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣?,。

　　請(qǐng)嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)操作,，以確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。