小鼠血管緊張素(Ang)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)使用說明書 本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命,，追求企業(yè)競(jìng)爭(zhēng)力的不斷提升。公司在經(jīng)營中始終秉承：遵紀(jì)守法，嚴(yán)于律己，寬仁以待,，敢于承擔(dān)的企業(yè)精神作為標(biāo)準(zhǔn)，以過硬的質(zhì)量和優(yōu)良的服務(wù)來維護(hù)和拓展市場(chǎng),，較大限度的滿足客戶的需求,。與客戶的共贏,，是我們的發(fā)展目標(biāo),，本生，您信任的合作伙伴,！本生試劑盒

　　樣本處理及要求

　　1. 血清：將收集于血清分離管的全血標(biāo)本在室溫放置2小時(shí)或4℃過夜,，然后1000×g離心20 分鐘，取上清即可,，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

　　2. 血漿：用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標(biāo)本,，并將標(biāo)本在采集后的30分鐘內(nèi)于2-8℃ 1000×g離心15分鐘,，取上清即可檢測(cè)，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融,。

　　3. 組織勻漿：用預(yù)冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細(xì)胞會(huì)影響測(cè)量結(jié)果),，稱重后將組織剪碎,。將剪碎的組織與對(duì)應(yīng)體積的PBS(一般按1:9的重量體積比，比如1g的組織樣品對(duì)應(yīng)9mL的PBS,，具體體積可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要適當(dāng)調(diào)整,，并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中,，于冰上充分研磨,。為了進(jìn)一步裂解組織細(xì)胞，可以對(duì)勻漿液進(jìn)行超聲破碎,，或反復(fù)凍融,。后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘，取上清檢測(cè),。

　　4. 細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本：請(qǐng)1000×g離心20分鐘,，取上清即可檢測(cè),，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融,。

　　注：標(biāo)本溶血會(huì)影響后檢測(cè)結(jié)果,，因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測(cè)。

　　需要而未提供的試劑盒器材

　　1.酶標(biāo)儀(450nm)

　　2.高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL,、2-20uL,、20-200uL、200-1000uL

　　3.37℃恒溫箱

　　4.蒸餾水或去離子水

　　小鼠血管緊張素II(Ang II)ELISA試劑盒組成

　　名稱96孔配置48孔配置備注

　　微孔酶標(biāo)板8孔×12條8孔×6條無

　　標(biāo)準(zhǔn)品0.3mL*6管0.3mL*6管無

　　樣本稀釋液6mL3mL無

　　檢測(cè)抗體-HRP10mL5mL無

　　20×洗滌緩沖液25mL15mL按說明書進(jìn)行稀釋

　　底物A6mL3mL無

　　底物B6mL3mL無

　　終止液6mL3mL無

　　封板膜2張2張無

　　說明書1份1份無

　　自封袋1個(gè)1個(gè)無

　　備注：

　　1,、標(biāo)準(zhǔn)品濃度依次為：200,、100、50,、25,、12.5、6.25 pg/ml

　　2,、經(jīng)過大量正常標(biāo)本檢驗(yàn),，標(biāo)本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測(cè)范圍內(nèi)，實(shí)驗(yàn)過程中直接取50μL樣本上樣即可,。當(dāng)有部分樣本值超過大標(biāo)準(zhǔn)品濃度時(shí),，可用樣本稀釋液將標(biāo)本進(jìn)行適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

　　注意事項(xiàng)

　　1,、嚴(yán)格按照規(guī)定的時(shí)間和溫度進(jìn)行溫育以保證準(zhǔn)確結(jié)果,。所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑,。

　　2,、洗板不正確可以導(dǎo)致不準(zhǔn)確的結(jié)果。在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體,。溫育過程中不要讓微孔干燥掉,。

　　3、消除板底殘留的液體和手指印,，否則影響OD值,。

　　4、底物顯色液應(yīng)呈無色或很淺的顏色,，已經(jīng)變藍(lán)的底物液不能使用,。

　　5、避免試劑和標(biāo)本的交叉污染以免造成錯(cuò)誤結(jié)果,。

　　6,、在儲(chǔ)存和溫育時(shí)避免強(qiáng)光直接照射。

　　7、平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上,。

　　8,、任何反應(yīng)試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強(qiáng)烈氣體。任何漂白成分都會(huì)破壞試劑盒中反應(yīng)試劑的生物活性,。

　　9,、不能使用過期產(chǎn)品。

　　10,、如果可能傳播疾病,，所有的樣品都應(yīng)管理好，按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測(cè)裝置,。

　　試劑準(zhǔn)備

　　試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡后方可使用,。

　　20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水,。

　　操作步驟

　　1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

　　2. 設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL;

　　3.樣本孔中加入待測(cè)樣本50μL;空白孔不加,。

　　4. 除空白孔外,，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL,，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min,。

　　5. 棄去液體,，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液(350μL),，靜置1min,，甩去洗滌液，吸水紙上拍干,，如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機(jī)洗板),。

　　6.每孔加入底物A、B各50μL,，37℃避光孵育15min,。

　　7.每孔加入終止液50μL，15min內(nèi),，在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值,。

　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果計(jì)算

　　以所測(cè)標(biāo)準(zhǔn)品的OD值為橫坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)品的濃度值為縱坐標(biāo),，在坐標(biāo)紙上或用相關(guān)軟件繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,，并得到直線回歸方程，將樣品的OD值代入方程，計(jì)算出樣品的濃度,。

　　試劑盒性能

　　1,、檢測(cè)范圍：6.25 pg/ml – 200 pg/ml。

　　2,、靈敏度：低檢測(cè)濃度小于1.0 pg/ml,。

　　3、特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng),。

　　4,、重復(fù)性：板內(nèi)變異系數(shù)小于10% ，板間變異系數(shù)小于15% ,。