雞層連蛋白板層素(LN)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)使用說(shuō)明書 本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命,，追求企業(yè)競(jìng)爭(zhēng)力的不斷提升,。公司在經(jīng)營(yíng)中始終秉承：遵紀(jì)守法,，嚴(yán)于律己，寬仁以待,，敢于承擔(dān)的企業(yè)精神作為標(biāo)準(zhǔn),，以過(guò)硬的質(zhì)量和優(yōu)良的服務(wù)來(lái)維護(hù)和拓展市場(chǎng)，較大限度的滿足客戶的需求。與客戶的共贏,，是我們的發(fā)展目標(biāo),，本生，您信任的合作伙伴,！本生試劑盒

　　ELISA試劑盒技術(shù)流程

　　雙抗體夾心法(檢測(cè)未知抗原)

　　1,、用緩沖液將抗體稀釋至1-10ug/ml。在反應(yīng)孔中加0.1ml,，4℃ 過(guò)夜,。次日，棄去孔內(nèi)溶液,，用洗滌緩沖液洗3次,。

　　2、加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.05ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,，置37℃ 孵育1小時(shí),。然后洗滌(同時(shí)做空白孔，陰性對(duì)照孔及陽(yáng)性對(duì)照孔),。

　　3,、加酶標(biāo)抗體：于各反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.05ml,。37℃ 孵育0.5～1小時(shí),，洗滌。

　　4,、加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml,，37℃ 10～30分鐘。

　　5,、終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml

　　6,、結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,，陽(yáng)性程度越強(qiáng),，陰性反應(yīng)為無(wú)色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺,，以“+",、“-"號(hào)表示。也可測(cè)OD值：在ELISA檢測(cè)儀上,，于450nm(若以ABTS顯色,，則410nm)處，以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值,，若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍,，即為陽(yáng)性,。

　　間接法(檢測(cè)未知抗體)

　　1、用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1-10ug/ml,， 每孔加0.1ml,，4℃過(guò)夜。次日洗滌3次,。

　　2,、加樣：加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.05ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時(shí),洗滌。(同時(shí)做空白,、陰性及陽(yáng)性孔對(duì)照)

　　3,、加酶標(biāo)抗體：于反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體(抗抗體)0.05ml,，37℃孵育30-60分鐘,，洗滌,最后一遍用DDW洗滌。

　　4,、加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml,，37℃ 10～30分鐘。

　　5,、終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml

　　6,、結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,，陽(yáng)性程度越強(qiáng),，陰性反應(yīng)為無(wú)色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺,，以“+",、“-"號(hào)表示。也可測(cè)OD值：在ELISA檢測(cè)儀上,，于450nm(若以ABTS顯色,，則410nm)處，以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值,，若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍,，即為陽(yáng)性。

　　ELISA試劑盒需自備的設(shè)備及試劑

　　1. 450±10nm濾光片的酶標(biāo)儀(建議儀器使用前提前預(yù)熱)

　　2. 單道或多道微量加液器及吸頭

　　3. 稀釋樣品的EP管

　　4. 蒸餾水或去離子水

　　5. 吸水紙

　　6. 盛放洗液的容器

　　ELISA試劑盒試劑準(zhǔn)備

　　1. 使用前將所有的試劑和標(biāo)本緩慢均衡至室溫(18-25oC),，試劑不能直接在37oC溶解,。

　　2. 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品)：每瓶標(biāo)準(zhǔn)品加入標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1mL，蓋好后室溫靜置大約10分鐘,，同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解,，其濃度為2000pg/mL。準(zhǔn)備7個(gè)稀釋標(biāo)準(zhǔn)品的EP管,，每個(gè)EP管中加入150μL的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液,，如圖所示依次倍比稀釋成不同的梯度， 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液(0pg/mL)直接作為空白孔,。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性,，每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

　　3. 濃洗滌液：用580mL蒸餾水或去離子水將20mL濃洗滌液稀釋至600mL,，進(jìn)行30倍稀釋,。

　　ELISA試劑盒的儲(chǔ)存及有效期

　　1. 未開封的試劑盒：所有試劑均按試劑瓶標(biāo)簽上所示保存。請(qǐng)注意,，收到試劑盒后請(qǐng)盡快將TMB 洗滌液,，終止液保存于4℃，其他試劑保存于-20℃,。

　　2. 使用后的試劑盒：剩余試劑仍需按照試劑瓶標(biāo)簽所示的溫度保存,，開封后的酶標(biāo)板要加干燥劑后密封保存于-20℃，避免潮濕,。

　　注意：

　　試劑盒內(nèi)酶標(biāo)條可拆卸,，按實(shí)驗(yàn)需求可分多次使用;使用后的剩余試劑盒建議在實(shí)驗(yàn)后1個(gè)月內(nèi)使用完畢。產(chǎn)品過(guò)期時(shí)間以盒子上的標(biāo)簽為準(zhǔn),，保質(zhì)期內(nèi)所有組分都確保是穩(wěn)定的,。

　　ELISA試劑盒報(bào)告內(nèi)容及標(biāo)準(zhǔn)

　　1、ELISA標(biāo)準(zhǔn)曲線;

　　2,、詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)步驟;

　　3,、完整的實(shí)驗(yàn)報(bào)告(試劑耗材，實(shí)驗(yàn)方法,，實(shí)驗(yàn)結(jié)果及結(jié)果說(shuō)明);