大鼠尿微量白蛋白(mALB)ELISA試劑盒實驗使用說明書 本生一直視質量控制為企業(yè)的生命，追求企業(yè)競爭力的不斷提升,。公司在經(jīng)營中始終秉承：遵紀守法,，嚴于律己，寬仁以待,，敢于承擔的企業(yè)精神作為標準,，以過硬的質量和優(yōu)良的服務來維護和拓展市場，較大限度的滿足客戶的需求,。與客戶的共贏,，是我們的發(fā)展目標，本生,，您信任的合作伙伴,！本生試劑盒

　　大鼠尿微量白蛋白(ALB)Elisa試劑盒說明書

　　本試劑盒僅供研究使用。

　　檢測范圍： 96T

　　15μg/ml -320μg/ml

　　使用目的：

　　本試劑盒用于測定大鼠血清,、血漿及相關液體樣本中尿微量白蛋白(ALB)含量,。

　　實驗原理

　　大鼠尿微量白蛋白(ALB)Elisa試劑盒說明書

　　本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠尿微量白蛋白(ALB)水平。用純化的大鼠尿微量白蛋白(ALB)抗體包被微孔板,，制成固相抗體,，往包被單抗的微孔中依次加入尿微量白蛋白(ALB)，再與HRP 標記的尿微量白蛋白(ALB)抗體結合,，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB 顯色,。TMB 在HRP 酶的催化下轉化成藍色,，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的尿微量白蛋白(ALB)呈正關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),，通過標準曲線計算樣品中大鼠尿微量白蛋白(ALB)濃度,。

　　試劑盒組成

　　1 30 倍濃縮洗滌液20ml×1 瓶7 終止液6ml×1 瓶

　　2 酶標試劑6ml×1 瓶8 標準品(640μg/ml) 0.5ml×1 瓶

　　3 酶標包被板12 孔×8 條9 標準品稀釋液1.5ml×1 瓶

　　4 樣品稀釋液6ml×1 瓶10 說明書1 份

　　5 顯色劑A 液6ml×1 瓶11 封板膜2 張

　　6 顯色劑B 液6ml×1/瓶12 密封袋1 個

　　標本要求

　　1.標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行,，提取后應盡快進行實驗,。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存,，但應避免反復凍融

　　2.不能檢測含NaN3 的樣品,，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

　　操作步驟

　　1. 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支,，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀

　　釋,。

　　320μg/ml 5 號標準品150μl 的原倍標準品加入150μl 標準品稀釋液

　　160μg/ml 4 號標準品150μl 的5 號標準品加入150μl 標準品稀釋液

　　80μg/ml 3 號標準品150μl 的4 號標準品加入150μl 標準品稀釋液

　　40μg/ml 2 號標準品150μl 的3 號標準品加入150μl 標準品稀釋液

　　20μg/ml 1 號標準品150μl 的2 號標準品加入150μl 標準品稀釋液

　　2. 加樣：分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同),、標準孔,、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,，然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5 倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動混勻。

　　3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘,。

　　4. 配液：將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋后備用

　　5. 洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體，甩干,，每孔加滿洗滌液,，靜置30 秒后棄去，如此重復5 次,，拍干,。

　　6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外,。

　　7. 溫育：操作同3,。

　　8. 洗滌：操作同5。

　　9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl,，再加入顯色劑B50μl,，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15 分鐘.

　　10. 終止：每孔加終止液50μl,，終止反應(此時藍色立轉黃色),。

　　11. 測定：以空白空調零,，450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。測定應在加終止液后15 分鐘以內(nèi)進行,。

　　操作程序總結：

　　計算

　　以標準物的濃度為橫坐標,，OD 值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線,，根據(jù)樣品的OD 值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與OD 值計算出標準曲線的直線回歸方程式,，將樣品的OD 值代入方程式，計算出樣品濃度,，再乘以稀釋倍數(shù),，即為樣品的實際濃度。

　　注意事項

　　1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用,，酶標包被板開封后如未用完,，板條應裝入密封袋中保存。

　　2.濃洗滌液可能會有結晶析出,，稀釋時可在水浴中加溫助溶,，洗滌時不影響結果。

　　3.各步加樣均應使用加樣器,，并經(jīng)常校對其準確性,，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5 分鐘內(nèi),，如標本數(shù)量多,，推薦使用排槍加樣。

　　4. 請每次測定的同時做標準曲線,，做復孔,。如標本中待測物質含量過高(樣本OD 值大于標準品孔*孔的OD 值)，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n 倍)后再測定,，計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5),。

　　5. 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染,。

　　6.底物請避光保存,。

　　7.嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.

　　8.所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理,。

　　9.本試劑不同批號組分不得混用。

　　10. 如與英文說明書有異,，以英文說明書為準,。

　　保存條件及有效期

　　1.試劑盒保存：;2-8℃。

　　2.有效期：6 個月