人半乳糖6硫酸酯酶(Gal-6S)ELISA試劑盒實驗使用說明書  本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命,，追求企業(yè)競爭力的不斷提升。公司在經(jīng)營中始終秉承：遵紀守法,，嚴于律己,，寬仁以待，敢于承擔的企業(yè)精神作為標準,，以過硬的質(zhì)量和優(yōu)良的服務來維護和拓展市場，較大限度的滿足客戶的需求,。與客戶的共贏,，是我們的發(fā)展目標,。本生!您信任的合作伙伴。我們愿與您真誠合作,，共創(chuàng)美好的未來,。

　　人半乳糖6硫酸酯酶(Gal-6S)ELISA試劑盒說明書

　　本試劑僅供研究使用 目的：本試劑盒用于測定人血清，血漿及相關液體樣本中半乳糖6硫酸酯酶(Gal-6S)的活性,。

　　實驗原理：

　　本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人半乳糖6硫酸酯酶(Gal-6S)水平,。用純化的人半乳糖6硫酸酯酶(Gal-6S)抗體包被微孔板，制成固相抗體,，往包被單抗的微孔中加入半乳糖6硫酸酯酶(Gal-6S),，再與HRP標記的半乳糖6硫酸酯酶(Gal-6S)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色,。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的半乳糖6硫酸酯酶(Gal-6S)呈正相關,。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值)，通過標準曲線計算樣品中人半乳糖6硫酸酯酶(Gal-6S)的濃度,。

　　試劑盒組成：

　　試劑盒組成48孔配置96孔配置保存

　　說明書1份1份

　　封板膜2片(48)2片(96)

　　密封袋1個1個

　　酶標包被板1×481×962-8℃保存

　　標準品：450U/L0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存

　　標準品稀釋液1.5ml×1瓶1.5ml×1瓶2-8℃保存

　　酶標試劑3 ml×1瓶6 ml×1瓶2-8℃保存

　　樣品稀釋液3 ml×1瓶6 ml×1瓶2-8℃保存

　　顯色劑A液3 ml×1瓶6 ml×1瓶2-8℃保存

　　顯色劑B液3 ml×1瓶6 ml×1瓶2-8℃保存

　　終止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存

　　濃縮洗滌液(20ml×20倍)×1瓶(20ml×30倍)×1瓶2-8℃保存

　　樣本處理及要求：

　　1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘,，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,，保存過程中如出現(xiàn)沉淀,，應再次離心。

　　2. 血漿：應根據(jù)標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,，混合10-20分鐘后,，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,，保存過程中如有沉淀形成,，應該再次離心。

　　3. 尿液：用無菌管收集,，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成,，應再次離心,。胸腹水、腦脊液參照實行,。

　　4. 細胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時,，用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細收集上清,。檢測細胞內(nèi)的成份時,，用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右,。通過反復凍融,，以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細收集上清,。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心,。

　　5. 組織標本：切割標本后,，稱取重量。加入一定量的PBS,，PH7.4,。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩吮救诨笕匀槐３?-8℃的溫度,。加入一定量的PBS(PH7.4),，用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細收集上清,。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用,。

　　6. 標本采集后盡早進行提取,，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗,。若不能馬上進行試驗,，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融.

　　7. 不能檢測含NaN3的樣品,，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性,。

　　操作步驟：

　　1. 標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設標準品孔10孔，在*,、第二孔中分別加標準品100μl,，然后在*、第二孔中加標準品稀釋液50μl,，混勻;然后從*孔,、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三,、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,，混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五,、第六孔中,，再在第五,、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul，混勻;混勻后從第五,、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,，再在第七,、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第七,、第八孔中分別取50μl加到第九,、第十孔中，再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl,，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉,。(稀釋后各孔加樣量都為50μl，濃度分別為300 U/L,，200 U/L ,，100 U/L，50 U/L,，25 U/L),。

　　2. 加樣：分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同),、待測樣品孔,。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍),。加樣將樣品加于酶標板孔底部,，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻,。

　　3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。

　　4. 配液：將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。

　　5. 洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體,，甩干，每孔加滿洗滌液,，靜置30秒后棄去,，如此重復5次，拍干,。

　　6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl,，空白孔除外。

　　7. 溫育：操作同3,。

　　8. 洗滌：操作同5,。

　　9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl,，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色15分鐘.

　　10. 終止：每孔加終止液50μl,，終止反應(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。

　　11. 測定：以空白空調(diào)零,，450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值),。 測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

　　注意事項：

　　1. 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,，酶標包被板開封后如未用完,，板條應裝入密封袋中保存。

　　2. 濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,，稀釋時可在水浴中加溫助溶,，洗滌時不影響結(jié)果。

　　3. 各步加樣均應使用加樣器,，并經(jīng)常校對其準確性,，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi),，如標本數(shù)量多,，推薦使用排槍加樣。

　　4. 請每次測定的同時做標準曲線,，做復孔,。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值)，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,，計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5),。

　　5. 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染,。

　　6. 底物請避光保存,。

　　7. 嚴格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.

　　8. 所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理,。

　　9. 本試劑不同批號組分不得混用。

　　10. 如與英文說明書有異,，以英文說明書為準,。

　　計算：

　　以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標,，

　　在坐標紙上繪出標準曲線,，根據(jù)樣品的OD

　　值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋

　　倍數(shù);或用標準物的濃度與OD值計算出標

　　準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值

　　代入方程式，計算出樣品濃度,，再乘以稀釋

　　倍數(shù),，即為樣品的實際濃度。

　　試劑盒性能：

　　1.樣品線性回歸與預期濃度相關系數(shù)R值為0.92以上,。

　　2.批內(nèi)與批間應分別小于9%和15%

　　檢測范圍：

　　14 U/L -400 U/L

　　保存條件及有效期：

　　1.試劑盒保存：2-8℃,。

　　2.有效期：6個月