堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)試劑盒標本的采集與保存

　　1. 血清：

　　將收集于血清分離管的全血標本在室溫放置 2 小時或 4oC 過夜,，然后 1000×g 離心 20 分鐘，取上清即可,，或將上清置于-20oC 或-80oC 保存,，但應避免反復凍融。

　　2. 血漿：

　　用 EDTA 或肝素作為抗凝劑采集標本,，并將標本在采集后的 30 分鐘內于 2-8oC 1000×g 離心 15 分鐘,，取上清即可檢測，或將上清置于-20oC 或-80oC 保存,，但應避免反復凍融,。

　　3. 組織勻漿：

　　1) 取適量組織塊，于預冷PBS(0.01mol/L, pH 7.0-7.2)中清洗去除血液,，稱重后備用(組織塊較大需先剪碎后再勻漿);

　　2) 可同時選用多種勻漿方法達到較好的破碎效果：首先將組織塊移入玻璃勻漿器,，加入5-10mL 預冷PBS 進行充分研磨，該過程需在冰上進行(有條件實驗室可選用機器勻漿);得到的勻漿液可再利用超聲破碎或反復凍融 進一步處理(超聲破碎過程中注意冰浴降溫;反復凍融法可重復2 次),。

　　3) 將制備好的勻漿液于5000×g 離心5 分鐘,，留取上清即可檢測。

　　4. 細胞裂解液：

　　1)貼壁細胞需要先用胰酶消化,，離心收集細胞(懸浮細胞可直接離心收集);

　　2)將收集到的細胞用冷PBS 洗3 次;

　　3)物理方法裂解細胞(可先超聲破碎細胞,，再反復凍融)：

　　i 超聲破碎：取適量PBS 重懸細胞，用一定功率的超聲波處理細胞懸液,，使細胞急劇震蕩破裂,。

　　ii 反復凍融：將待破碎的細胞在-20 oC 以下冰凍，室溫融解,，反復3 次,，使細胞溶脹破碎。

　　4)將標本于2-8 oC 1500×g 離心10 分鐘,，收集上清備用,。

　　5. 細胞培養(yǎng)上清或其它生物標本：

　　請 1000×g 離心 20 分鐘,，取上清即可檢測，或將上清置于-20oC 或-80oC 保存,，但應避免反復凍融,。

　　注意：

　　1. 以上標本均需密封保存，4oC保存應小于1周,，-20oC不應超過1個月,，-80oC不應超過2個月。

　　2. 標本使用前應緩慢均衡至室溫,，不應加熱使之融解,。

　　3. 實驗前紅細胞裂解液必須用標準品稀釋液稀釋。

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