BUNSEN本生分享：熒光定量PCR耗材的選擇

　　PCR是分子生物學(xué)研究的基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn),，用于在短時(shí)間內(nèi)將單拷貝的目標(biāo)DNA序列擴(kuò)增至數(shù)百萬(wàn)拷貝,。除了選擇可靠的PCR儀外，用于PCR反應(yīng)的塑料耗材除考慮兼容性,，還要求避免存在污染物和抑制劑，同時(shí)又具有可保障最佳PCR效果的高質(zhì)量,。因此,，如何選擇作為用戶(hù)，了解如何選擇PCR / qPCR耗材,，顯得尤其重要,。

　　第一步，選擇通量

　　根據(jù)樣品數(shù)量選擇通量,，PCR耗材的最常見(jiàn)規(guī)格為：

　　管：0.5 mL, 0.2 mL, 0.1 mL

　　96 孔板：0.2 mL, 0.1 mL

　　384 孔板：0.02 mL

　　單管

　　8聯(lián)管

　　96孔板

　　384孔板

　　第二步,， 選擇加樣體積：不同類(lèi)型管，可供選擇的容量體積不同,。

　　單管: 0.5 mL, 0.2 mL(標(biāo)準(zhǔn)), 0.1 mL(低容,，或稱(chēng)快速)

　　8聯(lián)管： 0.2 mL(標(biāo)準(zhǔn)), 0.1 mL(低容，或稱(chēng)快速)

　　96 孔板：0.2 mL(標(biāo)準(zhǔn)), 0.1 mL(低容,，或稱(chēng)快速)

　　384 孔板：0.02 mL

　　“(低容)"意味著高度更低,。 低容耗材更短的設(shè)計(jì)程度減少了反應(yīng)體系上方的空間，降低了蒸發(fā)的影響并提高了熱傳導(dǎo)效率,，因此也被稱(chēng)為“快速"管或板,。

　　第三步， 對(duì)于PCR板的選擇,，需要進(jìn)一步根據(jù)實(shí)驗(yàn)類(lèi)型和儀器選擇裙邊,、切割角、顏色等,。

　　3.1裙邊： 根據(jù)儀器加熱模塊類(lèi)型選擇

　　無(wú)裙邊:

　　兼容絕大多數(shù)PCR儀和實(shí)時(shí)PCR儀的模塊,，易于剪裁，但不適用于自動(dòng)化應(yīng)用。

　　半裙邊：

　　板的邊緣周?chē)哂卸痰倪吘?，加熱或移液過(guò)程中提供足夠的支撐,，不宜變形彎曲

　　全裙邊：

　　有覆蓋板高度的邊緣，適用于自動(dòng)化操作

　　3.2顏色： 透明或白色

　　PCR板通常提供透明,、磨砂或白色不同的顏色形式,，以適用于不同類(lèi)型PCR反應(yīng)。在實(shí)時(shí)PCR的反應(yīng)時(shí),，與透明耗材相比,，我們更推薦使用白色塑料耗材，以實(shí)現(xiàn)靈敏和準(zhǔn)確的熒光檢測(cè),。

　　白色耗材通過(guò)阻止熒光折射出管來(lái)提高qPCR數(shù)據(jù)的靈敏度和一致性,。折射被最小化時(shí)，更多的信號(hào)被反射回檢測(cè)器,，從而增加信噪比(圖B),。此外，白色管壁可阻止熒光信號(hào)傳遞至PCR儀模塊,，避免被吸收或不一致地反射熒光信號(hào),，從而使重復(fù)實(shí)驗(yàn)中的差異降至低。在極少數(shù)情況下,，如果熒光探測(cè)器由于白色孔的信號(hào)反射增強(qiáng)而過(guò)飽和,，可以使用磨砂孔替代。

　　3.4 切角

　　切角是對(duì)PCR板的一個(gè)角缺失,，取決于所需要適配的儀器,。切角可能位于96孔板的H1，H12或A12位置,，或384孔板的A24位置

　　3.5品牌選擇

　　市場(chǎng)上有許多品牌和廠家提供PCR耗材,，選擇時(shí)需要考慮哪些因素呢? PCR耗材品質(zhì)由包括原料、無(wú)污染,、一致性等決定,。

　　1. 原料：Thermo Scientific選用優(yōu)質(zhì)的全新醫(yī)用級(jí)聚丙烯原料

　　2. 生產(chǎn)環(huán)節(jié)：十萬(wàn)級(jí)潔凈車(chē)間生產(chǎn)，無(wú)RNase,、DNase和外源DNA污染

　　3. 批間一致性：遵循嚴(yán)格的生產(chǎn)標(biāo)準(zhǔn)和檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn),，由資深專(zhuān)家使用的設(shè)備進(jìn)行生產(chǎn)，確

　　保批間一致性和可追溯性,，確保用戶(hù)獲得可靠PCR實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù),。

　　第四步，選擇正確的PCR膜

　　PCR板選好后,，還需要選擇一張好的PCR膜來(lái)密封,，才能保證獲得準(zhǔn)確可靠的PCR數(shù)據(jù),，這對(duì)實(shí)時(shí)PCR尤其重要!

　　我們的Thermo Scientific™ Absolute™ qPCR粘性封口膜(貨號(hào)AB1170)產(chǎn)品采用壓力敏感密封設(shè)計(jì)。只有在施加壓力的情況下,，這種非粘性粘合產(chǎn)品才可以粘合到孔的邊緣上,。其只在需要粘合的位置產(chǎn)生良好的密封效果，使孔開(kāi)口位置變得超透明,，實(shí)現(xiàn)的熒光信號(hào)傳輸,。

　　強(qiáng)效壓敏粘附，可產(chǎn)生牢固的粘合效果,，以盡量減少蒸發(fā),，使每個(gè)樣本保持較高的PCR效率

　　其光學(xué)透明度可用于qPCR及其他熒光應(yīng)用

　　一致的封口厚度和透明度，確保整塊板信號(hào)傳輸相等

　　可剝離,，剝離后平板上無(wú)粘性殘留

　　膜兩端無(wú)粘性,，輕松進(jìn)行密封和去除操作

　　適用溫度范圍：–80°C至110°C

　　PCR耗材 本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命，追求企業(yè)競(jìng)爭(zhēng)力的不斷提升,。公司在經(jīng)營(yíng)中始終秉承：遵紀(jì)守法,，嚴(yán)于律己，寬仁以待,，敢于承擔(dān)的企業(yè)精神作為標(biāo)準(zhǔn),，以過(guò)硬的質(zhì)量和優(yōu)良的服務(wù)來(lái)維護(hù)和拓展市場(chǎng)，較大限度的滿足客戶(hù)的需求,。與客戶(hù)的共贏，是我們的發(fā)展目標(biāo),。本生!您信任的合作伙伴,。我們?cè)概c您真誠(chéng)合作，共創(chuàng)美好的未來(lái),。