實(shí)驗(yàn)干貨—ELISA實(shí)驗(yàn)顯性淡,、靈敏度低是為什么?怎么解決?

　　Elisa 實(shí)驗(yàn)以靈敏度較高,、特異性較好的特點(diǎn)在臨床上得到了廣泛的應(yīng)用，但操作中的各個(gè)環(huán)節(jié)對試驗(yàn)的檢測效果影響較大,，如不注意,，有可能導(dǎo)致顯色不全,、花板等結(jié)果。

　　酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)

　　一,、顯色淡,，靈敏度偏低

　　可能原因及解決方法：

　　試劑盒從2~8℃冰箱取出后打開盒蓋，于室溫平試劑盒未充分平衡衡至少20分鐘,，確保所有試劑已平衡至室溫(約25℃)樣品一般選擇培養(yǎng)上清,、血清、血漿,。其他樣品

　　2,、樣品不適合做ELISA檢測形式可能不適合做ELISA檢測或者需要優(yōu)化檢測的條件(例如稀釋液的成分)

　　3、酶標(biāo)板在貯存或洗后拍干時(shí)過分防止板過于干燥,，干燥

　　4,、包被抗體遭到破壞 操作溫和，移液槍不能碰到孔底

　　5,、樣本和抗體孵育條件不合適,，按照說明書條件，建議孵育過程中全程振蕩孵育

　　6,、洗滌浸泡時(shí)間過長,，按照說明書操作，勿人為增加漫泡時(shí)間

　　7,、偶聯(lián)HRP試劑污染棄去試劑,，重新配置

　　8、錯(cuò)誤的稀釋偶聯(lián)HRP試劑棄去試劑,，重新配置確定合適的孵育時(shí)間:人為判定-最高濃度的標(biāo)準(zhǔn)TMB底物孵育時(shí)間過短,，因非人。

　　9,、品出現(xiàn)深藍(lán)色;S4-5有淡藍(lán)色;機(jī)器判定620n為因素影響,，需要優(yōu)化孵育時(shí)間m波長下測定OD值達(dá)到0.6-0.65

　　10、樣本濃度過高或存在基質(zhì)效應(yīng)建議做不同稀釋倍數(shù),，確認(rèn)樣本最佳稀釋倍數(shù)酶標(biāo)儀濾光片設(shè)置有問題或者波

　　11,、確認(rèn)儀器設(shè)置及選擇正確的波長檢測長選擇不對不能使用細(xì)胞培養(yǎng)板，建議使用ELISA專用高吸

　　12,、酶標(biāo)板不適合做ELISA附力板子

　　二,、出現(xiàn)白板，陽性對照不顯色

　　可能原因及解決方法：

　　1,、顯色液變質(zhì)更換新的顯色液

　　2,、洗滌液配制有誤請按說明書所示稀釋倍數(shù)配制

　　3、未加酶結(jié)合物而認(rèn)為已加入注意不要漏加

　　4、終止液誤作洗滌液稀釋或當(dāng)?shù)孜镆菏褂妹看渭右呵熬鶓?yīng)看清標(biāo)簽請按照說明書所示配置說明書,，注意

　　5,、標(biāo)準(zhǔn)品稀釋方法錯(cuò)誤/或標(biāo)準(zhǔn)品有問題單位和稀釋倍數(shù)，建議使用同批次試劑盒,，不能混用不

　　6,、不同試劑盒或不同批號的試劑混用，同試劑盒或不同批號的試劑

　　三,、不正常的標(biāo)準(zhǔn)曲線

　　可能原因及解決方法：

　　1,、錯(cuò)誤的方法重懸標(biāo)準(zhǔn)品加入正確量的溶液重懸標(biāo)準(zhǔn)品，重懸充分

　　2,、標(biāo)準(zhǔn)品稀釋錯(cuò)誤按照說明書要求稀釋標(biāo)準(zhǔn)品

　　3,、標(biāo)準(zhǔn)品污染用一次性的滅菌吸頭，標(biāo)準(zhǔn)品貯存于2-8℃

　　4,、錯(cuò)誤的倍比稀釋步驟按照說明書倍比稀釋標(biāo)準(zhǔn)品TMB為底物和以O(shè)PD為底物的試劑盒均有使用,，

　　5、波長選擇錯(cuò)誤而前者比色波長為450nm,，后者為492nm,。雙波長比色分析優(yōu)于單波長

　　6、標(biāo)準(zhǔn)品混用不同批號試劑勿混用

　　7,、試劑盒在運(yùn)輸途中時(shí)間太盡量縮短運(yùn)輸時(shí)間,，夏季應(yīng)放冰塊降溫長，溫度太高,，標(biāo)準(zhǔn)品失ELISA未終止而直接檢測4顯色需終止后檢測,，否則會出現(xiàn)620nm比450nm讀

　　8、50nm和620nm數(shù)高的現(xiàn)象,。

　　四,、OD值超出正常范圍

　　可能原因及解決方法：

　　1、錯(cuò)誤的樣品或標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋按照說明書稀釋

　　2,、偶聯(lián)抗體濃度過高按照說明書調(diào)整到最佳的濃度

　　3,、TMB底物孵育時(shí)間過長調(diào)整到合適的孵育時(shí)間

　　4、樣品或標(biāo)準(zhǔn)品污染避免污染

　　5,、錯(cuò)誤的孵育時(shí)間或溫度按照說明書

　　6,、孵育時(shí)未加蓋導(dǎo)致溶液揮發(fā)和污染 貼封片或加蓋

　　elisa試劑盒本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命，追求企業(yè)競爭力的不斷提升,。公司在經(jīng)營中始終秉承：遵紀(jì)守法,，嚴(yán)于律己，寬仁以待,，敢于承擔(dān)的企業(yè)精神作為標(biāo)準(zhǔn),，以過硬的質(zhì)量和優(yōu)良的服務(wù)來維護(hù)和拓展市場,，較大限度的滿足客戶的需求。與客戶的共贏,，是我們的發(fā)展目標(biāo)。本生!您信任的合作伙伴,。我們愿與您真誠合作,，共創(chuàng)美好的未來。