ELISA試劑盒試驗中的溫育有哪些需要考慮

　　在ELISA試劑盒中一般有兩次抗原抗體反響,，即加標(biāo)本和加酶結(jié)合物后,。抗原抗體反響的完結(jié)需求有必定的溫度和時刻,，這一保溫進程稱為溫育(incubation),，有人稱之為孵育，在ELISA中似不恰當(dāng),。

　　溫育時刻的考慮：

　　ELISA屬固相免疫測定,，抗原、抗體的結(jié)合只在固相表面上發(fā)作,。以抗體包被的夾心法為例,，參加板孔中的標(biāo)本，其間的抗原并不是都有平等的和固相抗結(jié)合的時機,，只需最靠近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體接觸,。這是一個逐漸平衡的進程，因而需經(jīng)擴散才干到達反響的結(jié)尾,。在這以后參加的酶符號抗體與固相抗原的結(jié)合也相同如此,。這就是為什么ELISA反響總是需求必定時刻的溫育。

　　ELISA試劑盒溫育溫度的考究：

　　溫育常選用的溫度有43℃,、37℃,、室溫文4℃(冰箱溫度)等。37℃是試驗室中常用的保溫溫度,，也是大多數(shù)抗原抗體結(jié)合的適宜溫度,。在樹立ELISA辦法作反響動力學(xué)研討時，試驗標(biāo)明,，兩次抗原抗體反響一般在37℃經(jīng)1-2小時,，產(chǎn)物的生成可達。為加速反響,，可進步反響的溫度,，有些試驗在43℃進行，但不宜選用更高的溫度,?？乖贵w反響4℃更為，在放射免疫測定中多使反響在冰箱中過夜,，以構(gòu)成最多的沉積,。但因所需時刻太長，在ELISA中一般不予選用,。

　　溫育保溫的考慮：

　　保溫的方法除有的ELISA儀器附有特制的電熱塊外,，一般均選用水浴,，可將ELISA板置于水浴箱中，ELISA板底應(yīng)貼著水面,，使溫度敏捷平衡,。為防止蒸騰，板上應(yīng)加蓋,，也可用塑料貼封紙或保鮮膜覆蓋板孔,，此刻可讓反響板漂浮在水面上。若用保溫箱,，ELISA板應(yīng)放在濕盒內(nèi)，濕盒要選用傳熱性杰出的資料如金屬等,，在盒底墊濕的紗布,，最終將試劑盒板放在濕紗布上。濕盒應(yīng)先放在保溫箱中預(yù)溫至規(guī)則的溫度,，特別是在氣溫較低的時分更應(yīng)如此,。無論是水浴仍是濕盒溫育，反響板均不宜疊放,，以確保各板的溫度都能敏捷平衡,。室溫溫育的反響，操作時的室溫應(yīng)嚴厲約束在規(guī)則的范圍內(nèi),，規(guī)范室溫溫度是指20-25℃,，但具體操作時可根據(jù)說明書的要求操控溫育。室溫溫育時,，ELISA板只需平置于操作臺上即可,。

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