對于pcr 耗材,，八聯(lián)管、pcr 96 孔板選擇您不妨來看下!

　　首先今天我們來聊聊 PCR 實驗中很關鍵的要素——耗材,。作為 PCR ?？停私釨UNSEN本生 PCR 耗材相關的特性和術語是有必要的,。

　　市面上的 PCR 耗材有很多,，各種品牌、規(guī)格,、顏色等,，讓人眼花繚亂。我們來慢慢認識它,。材質(zhì) PCR 耗材的原材料通常是聚丙烯,。它是一種很好的耐熱惰性物質(zhì)(使用溫度范圍為 -30～140℃)，能夠承受 PCR 反應熱循環(huán)過程中的熱能變化,，很好地封閉和保護 PCR 反應體系中的物質(zhì),。

　　顏色常見的有白管和透明管。在傳統(tǒng) PCR 實驗中,，兩者沒有區(qū)別,。但是，在相同的熒光定量/qPCR 實驗中，對于頂端信號讀取的 qPCR 儀器(在管的上方采集熒光信號)來說,，白管的靈敏度和一致性相對更高,。這是為什么呢?

　　>>與透明管相比，A 白管得到的 Ct 值更低;B 白管得到的重復性更好

　　qPCR 的核心數(shù)據(jù)是 Ct 值,，而熒光信號是 Ct 值計算的數(shù)據(jù)來源,，所以管內(nèi)的熒光能否完好地傳遞至檢測器是至關重要的。白色的管壁能夠阻止熒光穿過管壁和折射(下圖 A),，進而防止熒光傳至加熱模塊(放管子的金屬孔壁),，被模塊吸收或發(fā)生不一致反射等情況。相比于透明管,，在白管的頂端能夠采集到更強,，更聚焦的熒光信號。

　　A 透明管和白管中熒光信號走向;B 分別加入等量熒光素后,，熒光強度對比

　　So，假如你正在使用的是頂讀 qPCR 儀,，那么安利一下,，不妨用白管試試哦~

　　質(zhì)量(是否干凈)這里強調(diào)一下耗材質(zhì)量的重要性。qPCR 耗材必須保證沒有污染物和抑制劑,。高壓和輻射能夠去除細菌和 DNA 酶,，但不能去除灰塵和 DNA 殘留，它們可能會抑制 PCR 反應或產(chǎn)生非特異性擴增,。物質(zhì)是具有吸光度的,，即便是很小的污染物也會吸收反應體系中的熒光，影響熒光信號的采集,。用一個夸張版的實驗來演示一下雜質(zhì)污染對實驗的影響,，在BUNSEN本生八聯(lián)排的一個反應孔中放入一粒雜質(zhì)，不出所料,，擴增結(jié)果曲線出現(xiàn)了顯著的異常,。

　　↑ 8 復孔重復性反應結(jié)果，左邊孔中的雜質(zhì)讓曲線“跑偏"

　　Tips 注意不要讓耗材長期暴露在空氣中,，取出耗材后,，一定要快速封好包裝袋，避免用裸手接觸,。有條件的話,，可在超凈臺中操作。容量/尺寸/通量

　　容量決定了可加樣的多少(反應體積),。加樣過多會導致熱傳導效率下降,，溢出或交叉污染;而加樣不足會引起樣品蒸發(fā)損耗。qPCR 儀的加熱模塊也會決定可適配的耗材和適用的反應體系大小。通量很容易理解,，就是單次實驗多能上多少個樣品,。常見的容量和通量規(guī)格如下表所示

　　單管/八聯(lián)排 0.2mL、0.1mL

　　96 孔板 0.2mL,、0.1mL

　　384 孔板 0.02mL

　　容量規(guī)格也常用標準和低容量來區(qū)分,。low profile(低容)耗材的高度更低，這種短小設計地減少了反應體系上方的空間(“死體積"——無用部分),，降低熱循環(huán)過程中的蒸發(fā)影響,，同時能夠讓加熱模塊更大程度地將其包裹，提高熱傳導效率,。因此,，低容管也被稱為“快速"管或板。

　　Tips 常見的反應體積一般為 20 µL,，推薦使用 0.1 mL 或 low profile 的低容反應管,。管壁厚度

　　PCR 耗材的管壁厚度要均一，才能提供一致的熱傳導,。超薄管壁較標準版薄 50%,，可進一步減少熱屏障，帶來更快更好的反應效果,。當然,，建議選超薄的。

　　透明度 qPCR 的管蓋和封膜需要具有很高的光學透性,，確保的熒光信號的穿透和傳遞,，減少失真(針對頂讀 qPCR 儀)。管壁的透明度越高反倒會影響實驗結(jié)果,，理由在前面解釋過,。傳統(tǒng) PCR 可忽略此特點。裙邊 PCR 板的裙邊指的是板的周圍延伸部分,。額.......這個裙邊作用是在構(gòu)建反應體系時為移液過程提供穩(wěn)定性支撐,，以及結(jié)合自動化工作站時提供機械強度和抓手。常見的有三種：無裙邊,、半裙邊和全裙邊(對應下圖 A,、B、C),。

　　Tips 簡單理解就是，裙邊的意義更多在于為工業(yè)化,、自動化批量處理提供便利,，與機械臂的結(jié)合。在常規(guī)科研實驗室中可能不太需要,，使用無裙邊板即可,。

　　封板膜

　　PCR 封板膜由透明塑料或鋁箔制成。黏性透明薄膜比較常見,，適配于 96 或 384 孔板,，要有足夠好的光透性?？梢栽诜饽r用個小卡片把孔周圍的膜壓緊,，避免漏氣等現(xiàn)象,。實驗室里的貼膜 boy 們應該很熟悉了吧,?？梢院唵卫斫鉃?.....

　　黏性鋁膜可能比較少見,，盡管不適合 qPCR，但對于光敏樣品是的耗材,，由于可以穿刺,，便于 PCR 中樣品轉(zhuǎn)移,。(適用于傳統(tǒng) PCR)

　　總結(jié)：耗材作為 PCR 體系的載體,，對提高實驗數(shù)據(jù)質(zhì)量是非常重要的。 有關 pcr 耗材,，八聯(lián)管,、pcr 96 孔板選擇!?本生生物小編就分享到這了,，看完本文您就應該有了基本的認識和了解相信大家都明白了吧!總的來說,，希望對大家有所幫助,。