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如何減少elisa試劑盒實(shí)驗(yàn)中背景因素的影響?
ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)的原理在我們平時(shí)看來覺得很簡(jiǎn)單,,無非就是固定抗原,,添加一抗、二抗和底物,,間中夾雜著洗滌和閉,。然而,即使是平常的洗滌和封閉,,如果做得不太好,,也有可能影響整個(gè)實(shí)驗(yàn)。在做完實(shí)驗(yàn)時(shí),,我們是否能獲得有用的信息,,這在很大程度上取決于結(jié)果的信噪比,。背景噪音會(huì)直接關(guān)系到結(jié)果的判斷,。那么怎樣才能降低ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)中的背景因素呢,我們一起來跟隨天津本生小編來了解下吧,。
洗滌很重要
洗滌步驟看似很無聊,,其實(shí)很重要,因?yàn)槿绻唇Y(jié)合的材料(如非特異結(jié)合的抗體或檢測(cè)試劑)殘留在微孔板中,,那么它會(huì)增加背景噪音,。如有必要,可增加洗滌液中的鹽濃度,,這會(huì)阻止非特異結(jié)合反應(yīng),。如果背景過高,而您懷疑洗滌不夠時(shí),,可以嘗試增加洗滌次數(shù),。
封閉更關(guān)鍵
封閉液的作用是讓不相關(guān)的蛋白占據(jù)微孔板中潛在的結(jié)合位點(diǎn)。這就降低了可產(chǎn)生信號(hào)的抗體非特異結(jié)合的機(jī)會(huì),。您當(dāng)然也希望抗體只與目的蛋白結(jié)合吧,。如果您的背景過高,懷疑封閉不充分,那么您可以嘗試使用更高濃度的封閉液,,或適當(dāng)延長(zhǎng)封閉時(shí)間,。如果您一直被背景問題所困擾,那么也許您該花些時(shí)間來優(yōu)化封閉液,。這可能需要時(shí)間,,但也是值得的。目主要有兩種類型的封閉液:蛋白和非離子型去污劑,。您使用的類型須取決于多個(gè)因素,,包括微孔板的表面試劑、吸附的抗原,、您的抗體和檢測(cè)試劑,。好的封閉液應(yīng)降低非特異性結(jié)合,,但它不應(yīng)當(dāng)與抗原、抗體或檢測(cè)試劑發(fā)生相互作用。zui常用的非離子型去污劑是Tween-20,。這種封閉液便宜、穩(wěn)定,,在去除洗滌過程中的一些非特異結(jié)合上很有用,。但它們只在存在時(shí)起作用,因?yàn)楹苋菀妆幌吹?。因此所有洗滌液中也必須添加封閉液,。請(qǐng)勿使用高濃度(正常濃度為0.01-0.1%),它會(huì)降低特異結(jié)合,,產(chǎn)生假陰性,。另一個(gè)選擇是使用蛋白和非離子型去污劑這兩種封閉液,后者可協(xié)助洗滌過程中的封閉,。蛋白封閉液則有所不同,。它們與開放位點(diǎn)結(jié)合并封閉,同時(shí)穩(wěn)定與微孔板結(jié)合的抗原分子,。常用的蛋白封閉液包括牛血清白蛋白(BSA),、脫脂奶粉、正常血清和魚明膠,。
抗體濃度須優(yōu)化
如果試劑稍有不同,,則可能需要優(yōu)化抗體的量。記住,,非特異的抗體結(jié)合會(huì)增加背景,。為了防止這一點(diǎn),切勿使用過多的一抗或二抗,。
檢測(cè)試劑要適量
另一點(diǎn)也很顯而易見:切勿使用過多的檢測(cè)試劑,。如果濃度過高,,或者未正確稀釋,則會(huì)導(dǎo)致高背景,。也不要顯色過度,,如有必要,優(yōu)化一下何時(shí)應(yīng)加入終止液,。
相信在注意這些細(xì)節(jié)后,,我們就可以降低ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)中背景因素,才可以獲得我們想要的結(jié)果信息,。
如何減少ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)中背景因素的影響?我司由具有行業(yè)背景和豐富市場(chǎng)經(jīng)驗(yàn)的業(yè)人士組成,,于為生命科學(xué)研究域提供產(chǎn)品,為廣大科研工作者提供服務(wù),。 既能滿足研發(fā)類客戶對(duì)產(chǎn)品種類,、包裝的特殊要求,也能滿足生產(chǎn)型企業(yè)從小試,、中試到規(guī)?;a(chǎn)各個(gè)階段的綜合需求。本生!您信任的合作伙伴,。我們?cè)概c您真誠合作,,共創(chuàng)美好的未來。
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