如何減少elisa試劑盒實驗中背景因素的影響?

　　ELISA試劑盒實驗的原理在我們平時看來覺得很簡單,，無非就是固定抗原,，添加一抗,、二抗和底物,，間中夾雜著洗滌和閉,。然而,，即使是平常的洗滌和封閉,，如果做得不太好,，也有可能影響整個實驗。在做完實驗時,，我們是否能獲得有用的信息,，這在很大程度上取決于結果的信噪比,。背景噪音會直接關系到結果的判斷。那么怎樣才能降低ELISA試劑盒實驗中的背景因素呢,，我們一起來跟隨天津本生小編來了解下吧,。

　　洗滌很重要

　　洗滌步驟看似很無聊，其實很重要,，因為如果未結合的材料（如非特異結合的抗體或檢測試劑）殘留在微孔板中,，那么它會增加背景噪音。如有必要,，可增加洗滌液中的鹽濃度,，這會阻止非特異結合反應。如果背景過高,，而您懷疑洗滌不夠時,，可以嘗試增加洗滌次數(shù)。

　　封閉更關鍵

　　封閉液的作用是讓不相關的蛋白占據(jù)微孔板中潛在的結合位點,。這就降低了可產生信號的抗體非特異結合的機會,。您當然也希望抗體只與目的蛋白結合吧。如果您的背景過高,，懷疑封閉不充分,，那么您可以嘗試使用更高濃度的封閉液，或適當延長封閉時間,。如果您一直被背景問題所困擾,，那么也許您該花些時間來優(yōu)化封閉液。這可能需要時間,，但也是值得的,。目主要有兩種類型的封閉液：蛋白和非離子型去污劑。您使用的類型須取決于多個因素,，包括微孔板的表面試劑,、吸附的抗原、您的抗體和檢測試劑,。好的封閉液應降低非特異性結合,，但它不應當與抗原、抗體或檢測試劑發(fā)生相互作用,。zui常用的非離子型去污劑是Tween-20,。這種封閉液便宜、穩(wěn)定,，在去除洗滌過程中的一些非特異結合上很有用,。但它們只在存在時起作用，因為很容易被洗掉,。因此所有洗滌液中也必須添加封閉液,。請勿使用高濃度（正常濃度為0.01-0.1%）,，它會降低特異結合，產生假陰性,。另一個選擇是使用蛋白和非離子型去污劑這兩種封閉液,，后者可協(xié)助洗滌過程中的封閉。蛋白封閉液則有所不同,。它們與開放位點結合并封閉,，同時穩(wěn)定與微孔板結合的抗原分子。常用的蛋白封閉液包括牛血清白蛋白（BSA）,、脫脂奶粉,、正常血清和魚明膠。

　　抗體濃度須優(yōu)化

　　如果試劑稍有不同,，則可能需要優(yōu)化抗體的量,。記住，非特異的抗體結合會增加背景,。為了防止這一點,，切勿使用過多的一抗或二抗。

　　檢測試劑要適量

　　另一點也很顯而易見：切勿使用過多的檢測試劑,。如果濃度過高,，或者未正確稀釋，則會導致高背景,。也不要顯色過度，如有必要,，優(yōu)化一下何時應加入終止液,。

　　相信在注意這些細節(jié)后，我們就可以降低ELISA試劑盒實驗中背景因素,，才可以獲得我們想要的結果信息,。

　　如何減少ELISA試劑盒實驗中背景因素的影響?我司由具有行業(yè)背景和豐富市場經(jīng)驗的業(yè)人士組成，于為生命科學研究域提供產品,，為廣大科研工作者提供服務,。  既能滿足研發(fā)類客戶對產品種類、包裝的特殊要求,，也能滿足生產型企業(yè)從小試,、中試到規(guī)模化生產各個階段的綜合需求,。本生!您信任的合作伙伴,。我們愿與您真誠合作，共創(chuàng)美好的未來,。