如何減少elisa試劑盒實(shí)驗(yàn)中背景因素的影響?

　　ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)的原理在我們平時(shí)看來(lái)覺(jué)得很簡(jiǎn)單,，無(wú)非就是固定抗原，添加一抗,、二抗和底物,，間中夾雜著洗滌和閉。然而,，即使是平常的洗滌和封閉,，如果做得不太好，也有可能影響整個(gè)實(shí)驗(yàn),。在做完實(shí)驗(yàn)時(shí),，我們是否能獲得有用的信息，這在很大程度上取決于結(jié)果的信噪比,。背景噪音會(huì)直接關(guān)系到結(jié)果的判斷,。那么怎樣才能降低ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)中的背景因素呢，我們一起來(lái)跟隨天津本生小編來(lái)了解下吧,。

　　洗滌很重要

　　洗滌步驟看似很無(wú)聊,，其實(shí)很重要，因?yàn)槿绻唇Y(jié)合的材料（如非特異結(jié)合的抗體或檢測(cè)試劑）殘留在微孔板中,，那么它會(huì)增加背景噪音,。如有必要，可增加洗滌液中的鹽濃度,，這會(huì)阻止非特異結(jié)合反應(yīng),。如果背景過(guò)高,，而您懷疑洗滌不夠時(shí)，可以嘗試增加洗滌次數(shù),。

　　封閉更關(guān)鍵

　　封閉液的作用是讓不相關(guān)的蛋白占據(jù)微孔板中潛在的結(jié)合位點(diǎn),。這就降低了可產(chǎn)生信號(hào)的抗體非特異結(jié)合的機(jī)會(huì)。您當(dāng)然也希望抗體只與目的蛋白結(jié)合吧,。如果您的背景過(guò)高，懷疑封閉不充分,，那么您可以嘗試使用更高濃度的封閉液,，或適當(dāng)延長(zhǎng)封閉時(shí)間。如果您一直被背景問(wèn)題所困擾,，那么也許您該花些時(shí)間來(lái)優(yōu)化封閉液,。這可能需要時(shí)間，但也是值得的,。目主要有兩種類型的封閉液：蛋白和非離子型去污劑,。您使用的類型須取決于多個(gè)因素，包括微孔板的表面試劑,、吸附的抗原,、您的抗體和檢測(cè)試劑。好的封閉液應(yīng)降低非特異性結(jié)合,，但它不應(yīng)當(dāng)與抗原,、抗體或檢測(cè)試劑發(fā)生相互作用。zui常用的非離子型去污劑是Tween-20,。這種封閉液便宜,、穩(wěn)定，在去除洗滌過(guò)程中的一些非特異結(jié)合上很有用,。但它們只在存在時(shí)起作用,，因?yàn)楹苋菀妆幌吹簟Ｒ虼怂邢礈煲褐幸脖仨毺砑臃忾]液,。請(qǐng)勿使用高濃度（正常濃度為0.01-0.1%）,，它會(huì)降低特異結(jié)合，產(chǎn)生假陰性,。另一個(gè)選擇是使用蛋白和非離子型去污劑這兩種封閉液,，后者可協(xié)助洗滌過(guò)程中的封閉。蛋白封閉液則有所不同,。它們與開放位點(diǎn)結(jié)合并封閉,，同時(shí)穩(wěn)定與微孔板結(jié)合的抗原分子。常用的蛋白封閉液包括牛血清白蛋白（BSA）,、脫脂奶粉,、正常血清和魚明膠,。

　　抗體濃度須優(yōu)化

　　如果試劑稍有不同，則可能需要優(yōu)化抗體的量,。記住,，非特異的抗體結(jié)合會(huì)增加背景。為了防止這一點(diǎn),，切勿使用過(guò)多的一抗或二抗,。

　　檢測(cè)試劑要適量

　　另一點(diǎn)也很顯而易見(jiàn)：切勿使用過(guò)多的檢測(cè)試劑。如果濃度過(guò)高,，或者未正確稀釋,，則會(huì)導(dǎo)致高背景。也不要顯色過(guò)度,，如有必要,，優(yōu)化一下何時(shí)應(yīng)加入終止液。

　　相信在注意這些細(xì)節(jié)后,，我們就可以降低ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)中背景因素,，才可以獲得我們想要的結(jié)果信息。

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