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如何減少elisa試劑盒實驗中背景因素的影響?

時間:2021/10/8閱讀:1772
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  如何減少elisa試劑盒實驗中背景因素的影響?


  ELISA試劑盒實驗的原理在我們平時看來覺得很簡單,,無非就是固定抗原,,添加一抗,、二抗和底物,,間中夾雜著洗滌和閉,。然而,,即使是平常的洗滌和封閉,,如果做得不太好,,也有可能影響整個實驗。在做完實驗時,,我們是否能獲得有用的信息,,這在很大程度上取決于結果的信噪比,。背景噪音會直接關系到結果的判斷。那么怎樣才能降低ELISA試劑盒實驗中的背景因素呢,,我們一起來跟隨天津本生小編來了解下吧,。

  洗滌很重要

  洗滌步驟看似很無聊,其實很重要,,因為如果未結合的材料(如非特異結合的抗體或檢測試劑)殘留在微孔板中,,那么它會增加背景噪音。如有必要,,可增加洗滌液中的鹽濃度,,這會阻止非特異結合反應。如果背景過高,,而您懷疑洗滌不夠時,,可以嘗試增加洗滌次數(shù)。

  封閉更關鍵

  封閉液的作用是讓不相關的蛋白占據(jù)微孔板中潛在的結合位點,。這就降低了可產生信號的抗體非特異結合的機會,。您當然也希望抗體只與目的蛋白結合吧。如果您的背景過高,,懷疑封閉不充分,,那么您可以嘗試使用更高濃度的封閉液,或適當延長封閉時間,。如果您一直被背景問題所困擾,,那么也許您該花些時間來優(yōu)化封閉液。這可能需要時間,,但也是值得的,。目主要有兩種類型的封閉液:蛋白和非離子型去污劑。您使用的類型須取決于多個因素,,包括微孔板的表面試劑,、吸附的抗原、您的抗體和檢測試劑,。好的封閉液應降低非特異性結合,,但它不應當與抗原、抗體或檢測試劑發(fā)生相互作用,。zui常用的非離子型去污劑是Tween-20,。這種封閉液便宜、穩(wěn)定,,在去除洗滌過程中的一些非特異結合上很有用,。但它們只在存在時起作用,因為很容易被洗掉,。因此所有洗滌液中也必須添加封閉液,。請勿使用高濃度(正常濃度為0.01-0.1%),,它會降低特異結合,產生假陰性,。另一個選擇是使用蛋白和非離子型去污劑這兩種封閉液,,后者可協(xié)助洗滌過程中的封閉。蛋白封閉液則有所不同,。它們與開放位點結合并封閉,,同時穩(wěn)定與微孔板結合的抗原分子。常用的蛋白封閉液包括牛血清白蛋白(BSA),、脫脂奶粉,、正常血清和魚明膠。

  抗體濃度須優(yōu)化

  如果試劑稍有不同,,則可能需要優(yōu)化抗體的量,。記住,非特異的抗體結合會增加背景,。為了防止這一點,,切勿使用過多的一抗或二抗。

  檢測試劑要適量

  另一點也很顯而易見:切勿使用過多的檢測試劑,。如果濃度過高,,或者未正確稀釋,則會導致高背景,。也不要顯色過度,如有必要,,優(yōu)化一下何時應加入終止液,。

  相信在注意這些細節(jié)后,我們就可以降低ELISA試劑盒實驗中背景因素,,才可以獲得我們想要的結果信息,。

  如何減少ELISA試劑盒實驗中背景因素的影響?我司由具有行業(yè)背景和豐富市場經(jīng)驗的業(yè)人士組成,于為生命科學研究域提供產品,,為廣大科研工作者提供服務,。  既能滿足研發(fā)類客戶對產品種類、包裝的特殊要求,,也能滿足生產型企業(yè)從小試,、中試到規(guī)模化生產各個階段的綜合需求,。本生!您信任的合作伙伴,。我們愿與您真誠合作,共創(chuàng)美好的未來,。


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