細(xì)胞爬片的操作方法以及技巧!

　　在醫(yī)學(xué)生物研究中,，免疫熒光檢測等需用到細(xì)胞爬片。現(xiàn)有的細(xì)胞爬片多采用表面平整,、光滑的透明玻璃玻片,。但在做免疫熒光檢測時，為了節(jié)約抗體,，需免疫組化筆在爬片上進行范圍的圈定,，將抗體加入劃定區(qū)域，免疫組化筆中的疏水成分阻滯抗體溢出所圈定的范圍,，從而達(dá)到節(jié)約抗體的目的,。細(xì)胞爬片是細(xì)胞培養(yǎng)中比較經(jīng)常會用到的，現(xiàn)將自己操作的一些方法與技巧拿與大家分享,。

　　細(xì)胞爬片的特點:

　　1.玻片表面經(jīng)過TC處理,，雙面均可使用。

　　2.γ射線滅菌，保證無菌,。

　　3.使用便捷,，只需打開包裝，將爬片放入孔板內(nèi),，將細(xì)胞懸液滴到爬片上即可培養(yǎng),。

　　4.爬片厚度為0.17mm，直徑為8mm/14mm/20mm/25mm.分別適用于48孔細(xì)胞培養(yǎng)板/24孔細(xì)胞培養(yǎng)板/12孔細(xì)胞培養(yǎng)板/6孔細(xì)胞培養(yǎng)板,。

　　5.*吸附：該玻片表面具有的陽離子電荷,，可以通過靜電作用吸附冰凍切片組織或細(xì)胞，使之粘附在玻片上,，進而在玻璃和切片組織之間形成共價鍵.因此,，無需粘黏劑或者蛋白包被，該玻片也能牢固的粘附切片或細(xì)胞,。

　　爬片的準(zhǔn)備:

　　1,、爬片可用一般的蓋玻片，也可用專用爬片;

　　2,、應(yīng)用蓋玻片,，可根據(jù)自己的需要剪裁成合適的大小，以備置于6孔板,、12孔板或24孔板;

　　3,、將剪裁好的爬片，置于濃硫酸中浸泡并過夜,，第二天先用自來水沖洗20遍,，再用三蒸水沖洗3遍(個人認(rèn)為主要目的是沖洗干凈就可以了)，放在飯盒或者培養(yǎng)皿(一定是玻璃的哦,，要不然就……)中烘干后進行高壓消毒,。

　　培養(yǎng)板的準(zhǔn)備:

　　1、泡酸過夜

　　2,、沖洗,，烘干(1、2步驟與前大致相同)

　　3,、放入超凈工作臺用紫外線照1～2小時就可以用了(在照之前可以將爬片一并放入,，若細(xì)胞貼壁能力不強，可經(jīng)多聚賴氨酸浸片后放入,。貼壁能力強的話,，就可以省略了,，進行紫外線消毒)

　　注：此步自己的經(jīng)驗是爬片可以先浸入消毒后的PBS內(nèi),，緊接著放入培養(yǎng)板內(nèi)。目的：浸過PBS的爬片依靠表面的液體，可以用培養(yǎng)板孔底貼和緊密,，以利于細(xì)胞長到爬片上,。(自己剛開始做的時候，經(jīng)常就是細(xì)胞全都長在了爬片與培養(yǎng)板之間,，爬片上細(xì)胞罕見,。)

　　細(xì)胞爬片:

　　1、胰酶消化細(xì)胞后計數(shù)

　　2,、根據(jù)自己的需要選擇合適的細(xì)胞密度種入培養(yǎng)板內(nèi)即可

　　3,、第二天即可進行干預(yù)措施

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