大鼠胃蛋白酶(PP)ELISA試劑盒操作步驟及注意要素

　　大鼠胃蛋白酶試劑盒操作：

　　大鼠胃蛋白酶試劑盒使用前,，將所有試劑充分混勻,。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,，以免加樣時(shí)加入大量的氣泡,，產(chǎn)生加樣上的誤差,。根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù),。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔,。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來(lái)定,，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。

　　標(biāo)本用標(biāo)本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應(yīng)孔內(nèi),。加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔,、加入待測(cè)樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體,。蓋上膜板,，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時(shí),。甩去孔內(nèi)液體,，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒,，甩去洗滌液,，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次,。如果用洗板機(jī)洗滌,，洗滌次數(shù)增加一次。每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,，輕輕振蕩混勻,，37℃溫育30分鐘。甩去孔內(nèi)液體,，每孔加滿洗滌液,，振蕩30秒，甩去洗滌液,，用吸水紙拍干,。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌,，洗滌次數(shù)增加一次,。每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻,，37℃溫育10分鐘,。避免光照。取出酶標(biāo)板,，迅速加入50ul終止液,，加入終止液后應(yīng)立即測(cè)定結(jié)果。在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值,。局限6號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品以上的結(jié)果為非線性的,，根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線無(wú)法得到精確的結(jié)果。

　　大鼠胃蛋白酶試劑盒樣品收集,、處理及保存方法:

　　1,、血清-----操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,。收集血液后,，1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。

　　2,、血漿-----EDTA,、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測(cè),。1000×g離心30分鐘去除顆粒,。細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

　　3,、組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎,。1000×g離心10分鐘。

　　4,、取上清液保存------如果樣品不立即使用,，應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復(fù)冷凍,。

　　注意：盡可能的不要使用溶血或高血脂血,。如果血清中大量顆粒，檢測(cè)前先離心或過(guò)濾,。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍,。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

　　大鼠胃蛋白酶試劑盒性能：

　　1,、靈敏度：最小的檢測(cè)濃度小于1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品,。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.1 ng/mL,。

　　2,、特異性：不與其它細(xì)胞因子反應(yīng),。

　　3、重復(fù)性：板內(nèi),、板間變異系數(shù)均小于10%,。

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