熒光定量PCR(qPCR)方法用途及說明

　　熒光定量PCR法(qPCR)：是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上,，將『針對支原體特異性保守序列的探針』做熒光標(biāo)記，使PCR擴增后的產(chǎn)物帶有熒光,，利用熒光信號的變化和配套軟件,，進行DNA擴增反應(yīng)的實時監(jiān)測，簡稱qPCR,。

　　(經(jīng)典法)

　　1) 符合歐洲藥典,、中國藥典要求，更適合細(xì)胞治療,，CAR-T,，抗體藥、疫苗等臨床項目申報和質(zhì)檢,。

　　2)樣本需先做DNA抽提,。抽提后樣本加入量為10μl。

　　3) 廠家可協(xié)助完善方法驗證步驟,。

　　支原體熒光定量PCR(qPCR)檢測試劑盒(一步法)

　　1)適合科研單位檢測,，或單位內(nèi)檢，用熒光定量PCR(qPCR)法檢測細(xì)胞或其他生物基質(zhì),。

　　2) 比藥典操作標(biāo)準(zhǔn)合并了一步,，(將內(nèi)控對照試劑預(yù)先混合在PCR mix試劑中)，操作更簡潔,。

　　3)樣本量為2μl,，靈敏度為50個基因組拷貝/反應(yīng)。結(jié)果準(zhǔn)確,。

　　優(yōu)點：

　?、凫`敏度高、特異性強,。

　?、跁r間短，2-3小時出結(jié)果,。

　?、蹤z測結(jié)果可定量。

　?、懿僮骱啽?。

　　缺點：

　　①對于已做支原體滅活處理的樣品,，由于支原體DNA仍舊存在其中,，PCR結(jié)果會出現(xiàn)假陽性。(可用培養(yǎng)法做補充驗證)

　?、诓煌瑥S家生產(chǎn)的試劑盒質(zhì)量差異巨大(由于引物及內(nèi)在設(shè)計不同),，需謹(jǐn)慎選擇，盡量在專業(yè)人員推薦指導(dǎo)下使用,。

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