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中級(jí)會(huì)員 | 第7年

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常見的酶標(biāo)板分為哪幾類?

時(shí)間:2021/3/12閱讀:2532
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  常見的酶標(biāo)板分為哪幾類?

  酶標(biāo)板在酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)中, 參與免疫學(xué)反應(yīng)的抗原,、抗體,、標(biāo)記抗體或抗原的純度、濃度和比例;緩沖液種類,、濃度和離子強(qiáng)度,、pH值和反應(yīng)溫度,、時(shí)間等條件起著關(guān)鍵作用。

  此外,作為載體的固相聚苯乙烯(Polystyrene)表面對(duì)抗原,、抗體或抗原抗體復(fù)合物的吸附也起著重要作用,。

  根據(jù)酶標(biāo)板與蛋白和其它分子結(jié)合能力的不同可以將酶標(biāo)板分為以下幾類:

  1、高結(jié)合力酶標(biāo)板:

  酶標(biāo)板經(jīng)表面處理后蛋白結(jié)合能力大大增強(qiáng),,可達(dá)300~400ng IgG/cm2,,主要結(jié)合的蛋白分子量>10kD。使用該類酶標(biāo)板可提高敏感性,,并可相對(duì)減少包被蛋白的濃度和用量,,不足之處為較易產(chǎn)生非特異性反應(yīng)??乖蚩贵w包被后,,以非離子去污劑無法有效地封閉未結(jié)合蛋白的部位,需使用蛋白作為封閉劑,。

  2,、中結(jié)合力酶標(biāo)板:

  酶標(biāo)板經(jīng)表面疏水鍵被動(dòng)與蛋白結(jié)合,適合作為分子量>20kD的大分子蛋白的固相載體,,其蛋白結(jié)合能力為200~300ng IgG/cm2,。

  由于該類酶標(biāo)板所具有的僅與大分子結(jié)合的特性,適用于作為未純化抗體或抗原的固相載體,,可降低潛在的非特異性叉反應(yīng),。該類板可以惰性蛋白或非離子去污劑作為封閉液。

  3,、氨基化酶標(biāo)板:

  酶標(biāo)板經(jīng)表面改性處理后擁有帶正電荷的氨基,,其疏水鍵由親水鍵取代。該類酶標(biāo)板適合作為小分子蛋白的固相載體,。使用合適的緩沖液和pH值,,其表面可通過離子鍵與帶負(fù)電荷的小分子結(jié)合。

  由于其表面的親水特性和可通過其它交聯(lián)劑共價(jià)結(jié)合的能力,,可用于固定溶于Triton-100,、Tween 20等去污劑的蛋白分子。該類板的缺陷為由于降低了疏水性,,一部分蛋白分子無法結(jié)合;

  此外,,其表面需有效地封閉。由于親水和共價(jià)的表面特性,,使用的封閉液必須能夠與非反應(yīng)性氨基基團(tuán)和所選擇的交聯(lián)劑中任何功能基團(tuán)發(fā)生作用,。

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