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細胞培養(yǎng)基的操作過程您了解嗎?
細胞培養(yǎng)基是人工模擬細胞在體內(nèi)成長的養(yǎng)分環(huán)境,,是供應(yīng)細胞養(yǎng)分和促進細胞成長增殖的物質(zhì)基礎(chǔ)。培育液或培育基的含義簡直相同,,英文都是medium。當(dāng)它是粉劑時,,傾向性地稱為培育基,,而將粉劑配成液體后,多稱為培育液,。培育液中常常補加血清,、抗生素等成分。
過程:
一,、復(fù)蘇
1.把凍存管從液氮中取出來,,當(dāng)即投入37℃水浴鍋中,輕微搖晃,。液體都融化后(大約1-1.5分鐘),,拿出來噴點酒精放到超凈工作臺里。
2.把上述細胞懸液吸到裝10ml培育基的15ml的離心管中(用培育基把凍存管洗一遍,,把粘在壁上的細胞都洗下來),,1000轉(zhuǎn)離心5分鐘。
3.把上清液倒掉,,加1ml培育基把細胞懸浮起來,。吸到裝有10ml培育基的10cm培育皿中前后左右輕輕搖晃,使培育皿中的細胞均勻分布,。
4.標好細胞品種和日期、培育人姓名等,,放到CO2培育箱中培育,,細胞貼壁后換培育基。
5.3天換一次培育基,。
二,、傳代
1.培育皿中的細胞覆蓋率到達80%-90%時要傳代。
2.把原有培育基吸掉。
3.加恰當(dāng)?shù)囊鹊鞍酌?能覆蓋細胞就行),,消化1-2分鐘,。
4.細胞都變圓后加如入等體積的含血清的培育基終止消化。
5.用移液槍吹打細胞,,把細胞都懸浮起來,。
6.把細胞吸到15ml的離心管中,1000轉(zhuǎn)離心5分鐘,。
7.倒掉上清液,,加1-2ml培育基,把細胞都吹起來,。
8.依據(jù)細胞品種把細胞傳到幾個培育皿中,。一般,癌細胞分5個,,正常細胞傳3個,,繼續(xù)培育。
三,、凍存
把細胞消化下來并離心(同上),。用配好的凍存液把細胞懸浮起來,分裝到滅菌的凍存管中,,中止幾分鐘,,寫明細胞品種,凍存日期4℃30min,,-20℃30min,,-80℃過夜,然后放到液氮灌中保存,。
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