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影響ELISA試劑盒測定成果的原因和解決辦法

時(shí)間:2021/3/5閱讀:2113
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  影響ELISA試劑盒測定成果的原因和解決辦法

  ELISA試劑盒方法被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測定,,具有靈敏度高,,操作簡略等優(yōu)點(diǎn),但是在詳細(xì)實(shí)驗(yàn)過程中影響要素較多,而且要按照嚴(yán)厲的闡明要求,,在臨床檢驗(yàn)中除正常反響外,,有時(shí)常可見到一些錯(cuò)誤成果(即假陽性或假陰性成果),。

  影響ELISA測定錯(cuò)誤成果的原因主要有:

 ?、贅?biāo)本要素;

  ②試劑要素;

 ?、鄄僮饕?。

  一,、類風(fēng)濕因子

  人血清中IgM,、IgG型類風(fēng)濕因子(RF)能夠與ELISA系統(tǒng)中的捕獲抗體及酶符號二抗的FC段直接結(jié)合,然后導(dǎo)致假陽性,。

  解決辦法:

  1.用F(ab)2替代完好的IgG;

  2.標(biāo)本用聯(lián)有熱變性(63℃,,10 min)IgG的固相吸附劑處理(將熱變性IgG加入到標(biāo)本稀釋液中同樣有用);

  3.檢測抗原時(shí),,能夠用2-巰基yi醇等加入到標(biāo)本稀釋液中,,使RF降解,。

  二,、補(bǔ)體

  ELISA系統(tǒng)中固相一抗和符號二抗過程中,,抗體分子發(fā)作變構(gòu),其FC段的補(bǔ)體C1q分子結(jié)合位點(diǎn)被暴露出來,,使C1q 能夠?qū)⒍哌B接起來,,然后形成假陽性。

  解決辦法:

  1.用EDTA稀釋標(biāo)本;

  2.用53℃,,10 min或56℃,,30 min加熱血清使C1q滅活。

  三,、嗜異性抗體

  人類血清中含有能與嚙齒類動(dòng)物(如鼠等)Ig(s) 結(jié)合的天然嗜異性抗體,,可將ELISA系統(tǒng)中一抗和二抗連接起來,也能形成假陽性。

  解決辦法:

  可在標(biāo)本稀釋液中加入過量的動(dòng)物Ig(s),,但加入量不足或亞類不同時(shí)無效,。

  四、嗜靶抗原的本身抗體

  抗甲狀腺球蛋白,、抗胰島素等嗜靶抗原的本身抗體,,有時(shí)能與靶抗原結(jié)合形成復(fù)合物,在ELISA方法中均可干擾抗原抗體測定成果,。

  解決辦法:

  測定前需用理化方法將其解離后再測定

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