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新生牛血清(Newborn Calf Serum)是來自剛出生~出生后2周內(nèi)的新生牛靜脈取血,。經(jīng)大規(guī)模混合后除菌過濾制成成品,,主要用于動物細(xì)胞培養(yǎng),,是醫(yī)藥生物技術(shù)產(chǎn)品的重要原材料之一,,其質(zhì)量好壞直接影響細(xì)胞生長情況,。
總蛋白含量是新生牛血清需要檢查的指標(biāo),。它屬于化學(xué)成分的初步分析,。有人統(tǒng)計過國產(chǎn)新生牛血清的蛋白含量1,,在比較各產(chǎn)區(qū)各年份后,,發(fā)現(xiàn)其含量在3.7%~4.4%之間。進(jìn)口新生牛血清并不與之*一致,。因為國內(nèi)的血清常采自奶牛,,而國外的血清常采自肉牛,。蛋白質(zhì)是新生牛血清的主要成分,,在細(xì)胞培養(yǎng)中起著維持滲透壓、pH 值緩沖,、物質(zhì)運輸和提供營養(yǎng),、促進(jìn)細(xì)胞粘附等重要作用。在胎牛血清中,,其總蛋白含量要更低,。
血紅蛋白含量也是新生牛血清一項重要檢測指標(biāo)。它是在血清運輸和加工過程中細(xì)胞裂解釋放到血清中的,。之所以檢測主要是由于牛血清中血紅蛋白具有氧化性,,其含量過高會引起羧基的產(chǎn)生和脂質(zhì)過氧化反應(yīng),從而導(dǎo)致生產(chǎn)細(xì)胞受損,,也會增加下游純化處理的難度,,給藥品質(zhì)量帶來安全隱患2。有報道血紅蛋白具有神經(jīng)毒性,。
使用時常見問題及解決方法:
一,、保存血清-好的方法?
血清應(yīng)保存在-5℃至-2O℃若存放于4℃時,請勿超過一個月,。若您一次無法用完一瓶,,建議將無菌分裝血清至恰當(dāng)?shù)臏缇萜鲀?nèi),再放回冷凍,。
二,、如何解凍血清才不會使產(chǎn)品質(zhì)量受損?
將血清從冷凍箱取出后,,先置于2-8℃冰箱使之溶解,然后在室溫下使之全溶,。但必須注意的是,溶解過程中必須規(guī)則地?fù)u晃均勻,。
三,、如何避免沉淀物的產(chǎn)生?
1.解凍血清時,請按照所建議的逐步解凍法(-2O℃至4℃至室溫),,若血清解凍時改變的溫度太大(如-20℃至37℃),,實驗顯示非常容易產(chǎn)生沉淀物,。
2.解凍血清時,請隨時將之搖晃均勻,,使溫度及成分均一,,減少沉淀的發(fā)生
3.請勿將血清置于37℃太久,。若在37℃放置太久,,血清會變得混濁,,同時血清中許多較不穩(wěn)定的成分也會因此受到損害,而影響血清的質(zhì)量,。
4.血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,,若非必要,可以無須做此步驟,。
5.若必須做血清的熱滅活,,請遵守56℃,30分鐘的原則,,并且隨時搖晃均勻,。溫度過高,時間過久或搖晃不均勻,,都會造成沉淀物的增多,。
四、血清解凍后發(fā)現(xiàn)有絮狀沉淀物出現(xiàn),,該如何處理?
欲去除這些絮狀沉淀物,,可以將血清分裝至無菌離心管內(nèi),以400g稍微離心,,上清液即可接著加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾,。但不建議以過濾的方法去除這些絮狀沉淀物,,因為它可能會阻塞過濾膜,。
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