elisa試劑盒的應(yīng)用原理
ELISA檢測試劑盒應(yīng)用定性夾心免疫檢測技術(shù),，用合成的HEV多肽抗原包被微孔板板條,，這些多肽是HEV毒株核心氨基酸序列中抗原性很強的肽段,，分別來自于該毒株的開放閱讀框2和開放閱讀框3,。將樣品或標準品加入孔中并孵育,，如果其中存在HEV IgM抗體,，這些抗體就會與HEV 的多肽抗原結(jié)合,，并固定在上面，洗板除去其它非特異性抗體和樣品中的其它成份,。然后加入羊抗人IgM-HRP（辣根過氧化物酶）酶結(jié)合物,，經(jīng)第二次孵育后，酶結(jié)合物就會與①次孵育結(jié)合上的HEV IgM抗體相結(jié)合,，洗板除去未結(jié)合的酶結(jié)合物,，加入TMB底物溶液，在第三次孵育時會發(fā)生酶-底物反應(yīng),，只有那些含有HEV IgM抗體和酶結(jié)合物所形成的復(fù)合物的孔才會發(fā)生顏色變化,，加入硫酸溶液終止酶和底物間的反應(yīng)，并在波長: 450nm處測量O.D.值,按照本HEV IgM抗體elisa試劑盒的測試標準, O.D.值大于或等于Cut-Off值的樣品被認為是初試陽性,。
ELISA的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記,。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性，酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性,，又保留酶的活性,。在測定時，受檢標本（測定其中的抗體或抗原）與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng),。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開,。再加入酶標記的抗原或抗體,，也通過反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。此時固相上的酶量與標本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例,。加入酶反應(yīng)的底物后,，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān),，故可根據(jù)呈色的深淺進行定性或定量分析,。由于酶的催化效率很高，間接地放大了免疫反應(yīng)的結(jié)果,，使測定方法達到很高的敏感度,。 ELISA可用于測定抗原，也可用于測定抗體,。
