細(xì)胞培養(yǎng)—如何揭開細(xì)胞凍存與復(fù)蘇的秘密,！

在美國科幻大片中，經(jīng)常會有因為某些特殊原因被凍存起來的超人,，醒來已經(jīng)過了百年,，容顏依舊、身體機能依舊,，依然可以拯救人類,。這其中就涉及到一個細(xì)胞凍存的概念,，細(xì)胞凍存是將細(xì)胞放在低溫環(huán)境，減少細(xì)胞代謝,，以便長期儲存的一種技術(shù),。細(xì)胞凍存是細(xì)胞保存的主要方法之一，起到了細(xì)胞保種的作用,。其實自己也可以動手來做關(guān)于細(xì)胞凍存的實驗,，下面本生科技就具體來分析下吧!

細(xì)胞凍存操作步驟：

1.用移液器吸走原培養(yǎng)基，加入適量PBS洗1-2遍;

2.加入適量胰酶,，置于培養(yǎng)箱中消化;

3.待消化到位后加入適量血清或*培養(yǎng)基終止消化,，800-1000rpm離心3-5min;

4.配制凍存液，待細(xì)胞離心后去上清,，加入凍存液重懸,，調(diào)整細(xì)胞濃度為3×106~1×107 cells/mL，轉(zhuǎn)移到凍存管中;

5.將凍存管放入程序降溫盒中,，-80度過夜,，然后轉(zhuǎn)移到液氮中保存。

6.凍存細(xì)胞后應(yīng)取出一管復(fù)蘇,，檢測細(xì)胞的存活率,。理論上細(xì)胞可在液氮內(nèi)長期保存，為穩(wěn)妥起見可在細(xì)胞凍存半年后復(fù)蘇培養(yǎng),，觀察細(xì)胞生長情況,，再繼續(xù)凍存。

細(xì)胞凍存注意事項：

1.凍存液常規(guī)配比為培養(yǎng)基：血清：DMSO=7:2:1,，如果細(xì)胞比較珍貴,，可以調(diào)整為血清：DMSO=9:1;

2.如果沒有程序降溫盒，可以將凍存細(xì)胞依次放于4度1h,，-20度2h,，-80過夜，再轉(zhuǎn)至液氮罐內(nèi);

3.凍存細(xì)胞儲存在-80度中通常不建議超過半年,，液氮中通常不建議超過2年;

4.細(xì)胞如果是次養(yǎng),，建議至少凍存兩個批次以上，以盡量避免因為凍存問題導(dǎo)致細(xì)胞絕種;

細(xì)胞復(fù)蘇操作步驟：

1.準(zhǔn)備工作：開啟恒溫水浴鍋,，將溫度調(diào)節(jié)在37℃,，取一離心管，加入5ml細(xì)胞培養(yǎng)基;

2.取出凍存管,，立即放入水浴鍋中快速搖晃,，讓凍存液迅速融化;

3.打開凍存管，將凍存液小心轉(zhuǎn)移到預(yù)先加入有培養(yǎng)基的離心管中，800rpm離心5分鐘;

4.小心棄掉上清,，加入約5ml培養(yǎng)基重懸細(xì)胞;

5.將所得細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移入培養(yǎng)瓶中,，蓋上瓶塞，置培養(yǎng)箱培養(yǎng),，觀察細(xì)胞的狀態(tài);