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MP人類免疫缺陷病毒確證試劑（免疫印跡法）

1)原理wB是將HIV蛋白經(jīng)SDS-PAGE,，由于蛋白分子大小不同而分離開來(lái)，然后再把這些已分離的不同蛋白帶轉(zhuǎn)移到硝化纖維膜上,，以后用不同的方式,，包括非常敏感的免疫酶法，檢測(cè)HIV抗體,。每一條硝化纖維膜上均含有經(jīng)電泳分離過(guò)的HIV抗原,。若有相應(yīng)抗體就會(huì)與硝化纖維膜條上的抗原帶相結(jié)合。然后與抗人的IgG酶結(jié)合物反應(yīng),。在底物作用下,，硝化纖維膜條帶上呈現(xiàn)紫色，表示陽(yáng)性反應(yīng),。

2)基本檢測(cè)程序

(1)準(zhǔn)備試劑：配制稀釋洗滌液,、印跡緩沖液,、工作酶結(jié)合溶液。 

(2)濕潤(rùn)膜條：用鑷子從塑料管中小心取出所需的硝化纖維膜條,，其中包括3條對(duì)照(強(qiáng)陽(yáng)性,、弱陽(yáng)性、陰性對(duì)照各1條),，并且將有編號(hào)的膜面向上放入分析槽中,，隨后加人2 ml已經(jīng)稀釋好的洗液，室溫(22～28℃)振蕩浸泡至少5 min,，然后吸干槽內(nèi)液體,。

(3)加樣：每槽中加入2 ml印跡緩沖液和20ul待檢標(biāo)本或?qū)φ昭?每個(gè)標(biāo)本都需換新的移液頭)。

(4)孵育：蓋上蓋子,，室溫振蕩1 h(也可采用室溫振蕩16～18 h),。

(5)洗滌：小心打開蓋子，吸干槽內(nèi)液體,，避免標(biāo)本交叉污染,。加入2 ml已經(jīng)稀釋的洗滌液，室溫浸泡振蕩5 min,，再吸干槽內(nèi)液體,。如此反復(fù)洗滌3次。

(6)酶結(jié)合：加入2 ml工作酶結(jié)合溶液,，蓋上蓋子,，室溫振蕩1 h(如果在6步驟中采用室溫振蕩16～18 h的，則此步酶反應(yīng)步驟中室溫振蕩30 min),。

(7)洗滌：吸干槽內(nèi)液體,，再洗滌3次。

(8)顯色：加入2 ml底物溶液,，室溫振蕩15 min,。

(9)終止：吸干槽內(nèi)液體，加入蒸餾水終止反應(yīng),，反復(fù)3次,，隨后用鑷子小心取出膜片于濾紙巾上，并開始讀膜片結(jié)果,。

(10)結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)：每次實(shí)驗(yàn)須設(shè)立對(duì)照血清,，如陽(yáng)性對(duì)照必須全部條譜帶均出現(xiàn)；弱陽(yáng)性對(duì)照可以譜帶不全,，但必須夠判定陽(yáng)性的結(jié)果,；陰性對(duì)照則無(wú)反應(yīng)譜帶。如果對(duì)照血清的結(jié)果未出現(xiàn)正確的譜帶,，則此次實(shí)驗(yàn)無(wú)效,，須重做,。同時(shí)，每條膜片上有一血清條帶,，此帶未出現(xiàn)說(shuō)明有可能漏加標(biāo)本,；那么此條帶為無(wú)效實(shí)驗(yàn)，也須重做,。

(11)結(jié)果判定：陰性標(biāo)本,，在膜片上不出現(xiàn)有顏色的譜帶。陽(yáng)性血清標(biāo)本可在膜上呈現(xiàn)水平的深紫色譜帶,。小分子量蛋白譜帶在膜片下端,，高分子量的譜帶在膜片上端。譜帶顏色的深淺與血清中HIV抗體的濃度呈正比,。典型的反應(yīng)譜帶可參照標(biāo)準(zhǔn)圖譜判斷(試劑盒中備有),。

中國(guó)疾病預(yù)防控制中心2004：年版的《全國(guó)艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范》WB檢測(cè)的判定標(biāo)準(zhǔn)如下。

HIV-1抗體陽(yáng)性：至少有2條env帶(gp41和gpl60／gpl20)出現(xiàn),；

至少有1條env帶和P24帶同時(shí)出現(xiàn),。

HIV-1抗體陰性：無(wú)抗體特異帶出現(xiàn)。
HIV-1抗體不確定：出現(xiàn)HIV特異性抗體帶,，但帶型不足以確認(rèn)陽(yáng)性的。

上述標(biāo)準(zhǔn)為判讀WB檢測(cè)結(jié)果的基本原則,，在實(shí)際工作中還應(yīng)參照所用試劑的說(shuō)明綜合判斷,，遇疑難情況應(yīng)報(bào)上級(jí)實(shí)驗(yàn)室解決。

如膜片上出現(xiàn)特異性HIV-2 gp36帶,，則須進(jìn)一步用檢測(cè)HIV-2抗體的WB藥盒進(jìn)一步檢測(cè),。HIV-2抗體血清學(xué)陽(yáng)性：至少有2條env帶(gp36和gpl40／gpl50)。HIV-2抗體陰性和HIV-2抗體不確定的判斷,，類同于HIV-1的判斷,。

MP人類免疫缺陷病毒確證試劑（免疫印跡法）