在實際滅菌器驗證過程中,，可以將生物指示劑放置于待滅菌產(chǎn)品中，或直接使用標(biāo)準(zhǔn)包裝的生物指示劑成品,。由于生物指示劑在不同介質(zhì)或環(huán)境中的耐受性會有所不同,，所以無論是將生物指示劑放置到待滅菌產(chǎn)品的方法，或直接使用標(biāo)準(zhǔn)包裝的生物指示劑成品,，均應(yīng)考慮待滅菌產(chǎn)品對細菌芽孢耐受性的影響,，如果待滅菌產(chǎn)品會使芽孢的耐受性增加，應(yīng)采用將生物指示劑放置于待滅菌產(chǎn)品中的方法,。如果生物指示劑與產(chǎn)品不相容,，可以用與產(chǎn)品相似的溶液來代替產(chǎn)品,。使用市售生物指示劑時,，應(yīng)確保生物指示劑的D值和總芽孢數(shù)等主要質(zhì)量參數(shù)的準(zhǔn)確性。

滅菌生物指示劑中D值如何測定：

  藥品生產(chǎn)中滅菌工藝的驗證與滅菌效果的監(jiān)控,，是影響產(chǎn)品安全性的關(guān)鍵要素,，也是藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范（GMP）檢查中的關(guān)注重點。無菌制劑的過度滅菌可能引入更多雜質(zhì),，誘發(fā)質(zhì)量與安全隱患,，而滅菌不充分則可能因微生物污染而導(dǎo)致藥害事件。今天，就帶大家簡單了解下衡量滅菌工藝的標(biāo)尺——滅菌生物指示劑的相關(guān)知識,。

 滅菌工藝驗證和滅菌效果監(jiān)控中使用的生物指示劑,，是衡量滅菌工藝的一把尺，此類產(chǎn)品的質(zhì)量直接影響到滅菌工藝的關(guān)鍵性技術(shù)參數(shù)和產(chǎn)品安全性,。

D值與Z值的意義與重要性：

   D值和Z值是評價滅菌生物指示劑產(chǎn)品質(zhì)量的關(guān)鍵性技術(shù)參數(shù),。D值即在規(guī)定滅菌溫度下，將生物指示劑產(chǎn)品中耐熱微生物殺滅90%（下降一個對數(shù)單位）所需的時間,。D值越大,，耐熱微生物殺滅速度越慢，該菌株的耐熱性越強,。Z值是指使某種微生物的D值下降一個對數(shù)單位里,，滅菌溫度需要升高的度數(shù)，Z值越大,，因溫度上升而取得的殺菌效果越小,。

D值如何測定：

　實驗步驟如下：產(chǎn)品在121℃下滅菌，設(shè)計不同的暴露時間,，覆蓋全部陽性反應(yīng),、全部陰性反應(yīng)和部分陽性、陰性反應(yīng)的區(qū)間,。每個暴露時間點所用的待測生物指示劑樣品為20支,，每次暴露的樣品批次和數(shù)量相同。每次暴露程序完成后,，立即按壓玻璃管,，使培養(yǎng)基與含菌紙片充分接觸，55℃培養(yǎng)48h,，記錄陽性/陰性反應(yīng)的指數(shù),。試驗重復(fù)3次，計算平均值和標(biāo)準(zhǔn)偏差,。

　存活孢子計數(shù)是計算D值的關(guān)鍵參數(shù),，存活孢子計數(shù)結(jié)果的準(zhǔn)確性取決于待測樣本的均勻性、耐熱菌株孢子與載體的分離程度,、熱擊的溫度和時間,、稀釋劑的選擇等。

　稀釋液中的離子強度會直接影響孢子的復(fù)蘇率,，因此推薦使用滅菌純化水作為稀釋液,。試驗優(yōu)化時需以滅菌生理鹽水，含吐溫-80的滅菌生理鹽水等作為稀釋劑進行孢子復(fù)蘇率的考察,。

　此外,，濕熱滅菌生物指示劑產(chǎn)品所選取的耐熱菌株嗜熱脂肪芽孢桿菌的遺傳背景,、產(chǎn)品包裝材質(zhì)和復(fù)蘇培養(yǎng)基適用性也會對D值測定的結(jié)果產(chǎn)生一定影響，但產(chǎn)品制作工藝中耐熱菌株的選擇,、耐熱菌株與載體的包被,、菌株耐熱能力對產(chǎn)品D值也會產(chǎn)生一些波動影響。