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液相色譜，色譜柱異常與解決辦法,！快分享給有需要的人學習
色譜柱異常與解決方法
柱壓與硅膠基質(zhì)的形態(tài)(如無定形或球形硅膠),、顆粒大小、填料合成條件,、裝柱條件,、所用流動相和分析時的溫度有關(guān)。
不同廠家的色譜柱柱壓會有所差別,，相同流動相和溫度的條件下,，不同廠家的新色譜柱有的柱壓可能相差4、5個MPa,，特別是低端和高性能色譜柱之間,，這一區(qū)別比較明顯,。這是由色譜柱廠家所選用的硅膠基質(zhì)及其生產(chǎn)條件決定的，這種差異的存在是正常的,。
同時需要說明的一點是,，柱壓與柱效有一定的關(guān)系，通常柱效高的色譜柱柱壓相對而言會高一點,，但柱壓高的色譜柱并不一定就具有高柱效,。
在色譜柱的使用過程中柱壓通常會出現(xiàn)兩種升高的形式：
第一種是，隨著使用時間的延長色譜柱柱壓慢慢上升,，這是正常的;
第二種是,，使用過程中(流動相和溫度沒有改變的條件下)色譜柱壓力突然升高很多。這種壓力突然升高的現(xiàn)象,，通常是由工作人員操作不當引起的,。
原因：
樣品太臟，使用前沒有過濾,，導致柱篩板堵塞;
樣品含有的雜質(zhì)在流動相中的溶解性不是很好,，與流動相混合后析出，導致柱塞板堵塞;
使用緩沖鹽,，處理錯誤,，緩沖鹽在色譜柱中析出，堵塞塞板和鍵合相顆粒之間的孔隙,。
解決辦法對于第二種,，即柱壓突然升高的情況，通常有以下幾種解決辦法：
將色譜柱反接,，用含水比例較大的流動相進行沖洗。
色譜柱進樣一端的篩板取下,，分別放在水中和甲醇中超聲或更換新的柱篩板,。如果柱效沒變，但柱壓仍然較高,，則應考慮進樣端填料受污染的問題,，因此除了取下進樣端篩板超聲外，還需要挖掉進樣端的部分填料,，挖去填料之前先檢查一下填料的顏色,，如果填料的顏色發(fā)生了變化，則應該挖掉直到見到白色的填料為止,。
挖掉后色譜柱將出現(xiàn)一個缺口,，填補缺口的填料可以從另一支相同品牌、相同型號的報廢色譜柱的出口端獲得,，填料用有機溶劑如甲醇等調(diào)成糊狀裝入缺口處,，壓緊刮平,，再裝上篩板。
色譜柱使用經(jīng)驗
色譜柱在使用前,，最好進行柱的性能測試,，并將結(jié)果保存起來，作為今后評價柱性能變化的參考,。
但要注意：柱性能可能由于所使用的樣品,、流動相、柱溫等條件的差異而有所不同;另外,，在做柱性能測試時是按照色譜柱出廠報告中的條件進行(出廠測試所使用的條件是*佳條件),，只有這樣，測得的結(jié)果才有可比性,。
1. 樣品的前處理
a. 最好使用流動相溶解樣品,。
b. 使用予處理柱除去樣品中的強極性或與柱填料產(chǎn)生不可逆吸附的雜質(zhì)。
c. 使用0.45µm的過濾膜過濾除去微粒雜質(zhì),。
2. 流動相的配制
液相色譜是樣品組分在柱填料與流動相之間質(zhì)量交換而達到分離的目的,，因此要求流動相具備以下的特點：
流動相對樣品具有一定的溶解能力，保證樣品組分不會沉淀在柱中(或長時間保留在柱中),。
流動相具有一定惰性,，與樣品不產(chǎn)生化學反應(特殊情況除外)。
流動相的黏度要盡量小,，以便在使用較長的分析柱時能得到好的分離效果;同時降低柱壓降,，延長液體泵的使用壽命(可運用提高溫度的方法降低流動相的黏度),。
流動相的物化性質(zhì)要與使用的檢測器相適應,。如使用UV檢測器，最好使用對紫外吸收較低的溶劑配制,。
流動相沸點不要太低,，否則容易產(chǎn)生氣泡，導致實驗無法進行,。
在流動相配制好后,，一定要進行脫氣。除去溶解在流動相中的微量氣體既有利于檢測,，還可以防止流動相中的微量氧與樣品發(fā)生作用,。
3. 流動相流速的選擇
因柱效是柱中流動相線性流速的函數(shù)，使用不同的流速可得到不同的柱效,。
對于一根特定的色譜柱,，要追求最佳柱效，最好使用最佳流速。對內(nèi)徑為4.6mm的色譜柱,，流速一般選擇1ml/min,，對于內(nèi)徑為4.0mm柱，流速0.8ml/min為佳,。當選用最佳流速時,，分析時間可能延長?？刹捎酶淖兞鲃酉嗟南礈鞆姸鹊姆椒ㄒ钥s短分析時間(如使用反相柱時,，可適當增加甲醇或乙腈的含量)。
注意
由于甲醇廉價,，對于反相柱推薦使用甲醇體系(必須使用乙腈的場合除外),。
對于正相柱推薦使用沸程為30-60℃的石油醚或提純后的己烷作流動相，沒有提純的己烷不得使用,。用水最好使用超純水(電阻率大于18兆歐),，去離子水及雙蒸水中含有酚類雜質(zhì)，有可能影響分析結(jié)果,。
含水流動相最*在實驗前配制,，尤其是夏天使用緩沖溶液作為流動相不要過夜。最好加入三氮化鈉,，防止細菌生長,。
流動相要求使用0.45 µm濾膜過濾，除去微粒雜質(zhì),。
使用HPLC級溶劑配制流動相,，使用合適的流動相可延長色譜柱的使用壽命，提高柱性能,。
沖柱子的目的
只要是有機溶劑就行,，不過黏度不要太大，因為有機溶劑能夠防止細菌生長,，沖柱子的目的就是為了防止細菌生長堵塞儀器系統(tǒng)和柱子,。一般甲醇和乙腈相互沖洗是沒有問題的，但乙腈要比甲醇價格貴的,。
保留時間變化的原因
柱頭塌陷
在使用過程中,，填料下沉,，在柱子進口處出現(xiàn)一個小空間,，使得分離效果不良。
補救方法：卸開柱頭螺絲,，找一點同類填料,，用甲醇濕潤后，添在柱子上,，反復幾次,。然后裝上螺絲,，用溶劑沖洗1-2小時，使之平衡,。
小結(jié)
正確使用緩沖鹽很有必要,，既可以防止緩沖鹽析出，也可以達到提高色譜柱使用壽命的目的,。我們不妨用一句話來總結(jié)它的使用方法：用前要過濾,，用后需沖洗。