實驗原理
葉綠素廣泛存在于果蔬等綠色植物組織中,，并在植物細胞中與蛋白質(zhì)結(jié)合成葉綠體,。當植物細胞死亡后，葉綠素即游離出來,，游離葉綠素很不穩(wěn)定,，對光、熱較敏感,；在酸性條件下葉綠素生成綠褐色的脫鎂葉綠素,，在稀堿液中可水解成鮮綠色的葉綠酸鹽以及葉綠醇和甲醇。高等植物中葉綠素有兩種：葉綠素a 和b,，兩者均易溶于乙醇,、乙mi、丙酮,。
葉綠素的含量測定方法有多種,，其中主要有：1.原子吸收光譜法：通過測定鎂元素的含量，進而間接計算葉綠素的含量,。2.分光光度法：利用分光光度計測定葉綠素提取液在大吸收波長下的吸光值,，即可用朗伯—比爾定律計算出提取液中各色素的含量。
葉綠素a和葉綠素b 在645nm 和663nm 處有大吸收,，且兩吸收曲線相交于652nm 處,。因此測定 提取液在645nm、663nm,、652nm 波長下的吸光值,，并根據(jù)經(jīng)驗公式可分別計算出葉綠素a、葉綠素b 和總?cè)~綠素的含量,。
儀器,、原料和試劑 儀器 分光光度計、電子頂載天平(感量0．01g),、研缽,、棕色容量瓶、小漏斗,、定量濾紙,、吸水紙、擦境紙,、滴管,。 原料 新鮮(或烘干)的植物葉片 試劑 1. 96％乙醇(或80％丙酮) 2. 石英砂 3. 碳酸鈣粉。
操作步驟
取新鮮植物葉片(或其它綠色組織)或干材料，擦凈組織表面污物,，去除中脈剪碎,。稱取剪碎的新鮮樣品2g，放入研缽中,，加少量石英砂和碳酸鈣粉及3ml95％乙醇,，研成均漿，再加乙醇10ml,，繼續(xù)研磨至組織變白,。靜置3～5min。 取濾紙1張置于漏斗中,，用乙醇濕潤,，沿玻棒把提取液倒入漏斗，濾液流至100ml 棕色容量瓶中,；用少量乙醇沖洗研缽,、研棒及殘渣數(shù)次，后連同殘渣一起倒入漏斗中,。 用滴管吸取乙醇,，將濾紙上的葉綠體色素全部洗入容量瓶中。直至濾紙和殘渣中無綠色為止,。后用乙醇定容至100ml,，搖勻。 取葉綠體色素提取液在波長665nm,、645nm 和652nm 下測定吸光度,，以95％乙醇為空白對照。
計算
按照實驗原理中提供的經(jīng)驗公式,，分別計算植物材料中葉綠素a,、b 和總?cè)~綠素的含量。
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