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實(shí)驗(yàn)原理  

葉綠素廣泛存在于果蔬等綠色植物組織中,，并在植物細(xì)胞中與蛋白質(zhì)結(jié)合成葉綠體。當(dāng)植物細(xì)胞死亡后,，葉綠素即游離出來,，游離葉綠素很不穩(wěn)定，對光,、熱較敏感,；在酸性條件下葉綠素生成綠褐色的脫鎂葉綠素，在稀堿液中可水解成鮮綠色的葉綠酸鹽以及葉綠醇和甲醇,。高等植物中葉綠素有兩種：葉綠素a 和b,，兩者均易溶于乙醇、乙mi,、丙酮,。

葉綠素的含量測定方法有多種，其中主要有：1.原子吸收光譜法：通過測定鎂元素的含量,，進(jìn)而間接計(jì)算葉綠素的含量,。2.分光光度法：利用分光光度計(jì)測定葉綠素提取液在大吸收波長下的吸光值，即可用朗伯—比爾定律計(jì)算出提取液中各色素的含量,。

    葉綠素a和葉綠素b 在645nm 和663nm 處有大吸收,，且兩吸收曲線相交于652nm 處。因此測定  提取液在645nm,、663nm,、652nm 波長下的吸光值，并根據(jù)經(jīng)驗(yàn)公式可分別計(jì)算出葉綠素a,、葉綠素b 和總?cè)~綠素的含量,。 

儀器、原料和試劑 儀器  分光光度計(jì),、電子頂載天平(感量0．01g),、研缽、棕色容量瓶,、小漏斗,、定量濾紙、吸水紙,、擦境紙,、滴管。 原料  新鮮(或烘干)的植物葉片 試劑  1. 96％乙醇(或80％丙酮) 2. 石英砂 3. 碳酸鈣粉,。

操作步驟 

    取新鮮植物葉片(或其它綠色組織)或干材料,，擦凈組織表面污物,，去除中脈剪碎。稱取剪碎的新鮮樣品2g,，放入研缽中,，加少量石英砂和碳酸鈣粉及3ml95％乙醇，研成均漿,，再加乙醇10ml,，繼續(xù)研磨至組織變白。靜置3～5min,。  取濾紙1張置于漏斗中,，用乙醇濕潤，沿玻棒把提取液倒入漏斗,，濾液流至100ml 棕色容量瓶中；用少量乙醇沖洗研缽,、研棒及殘?jiān)鼣?shù)次,，后連同殘?jiān)黄鸬谷肼┒分小?nbsp;用滴管吸取乙醇，將濾紙上的葉綠體色素全部洗入容量瓶中,。直至濾紙和殘?jiān)袩o綠色為止,。后用乙醇定容至100ml，搖勻,。  取葉綠體色素提取液在波長665nm,、645nm 和652nm 下測定吸光度，以95％乙醇為空白對照,。

計(jì)算 

按照實(shí)驗(yàn)原理中提供的經(jīng)驗(yàn)公式,，分別計(jì)算植物材料中葉綠素a、b 和總?cè)~綠素的含量,。