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高效液相色譜儀可分為“高壓輸液泵",、“色譜柱"、“進樣器",、“檢測器",、“餾分收集器"以及“數(shù)據獲取與處理系統(tǒng)"等部分。
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高效液相色譜儀可分為“高壓輸液泵”,、“色譜柱”,、“進樣器”、“檢測器”,、“餾分收集器”以及“數(shù)據獲取與處理系統(tǒng)”等部分,。
色譜柱的填料和流動相的組分應按各品種項下的規(guī)定.常用的色譜柱填料有硅膠和化學鍵合硅膠。后者以十八烷基硅烷鍵合硅膠為常用辛基鍵合硅膠次之,,氰基或氨基鍵合硅膠也有使用,;離子交換填料用于離子交換色譜;凝膠或玻璃微球等,,用于分子排阻色譜等,。注樣量一般為數(shù)微升,。除另有規(guī)定外,柱溫為室溫,,檢測器為紫外吸收檢測器,。
在用紫外吸收檢測器時,,所用流動相應符合紫外分光光度法項下對溶劑的要求,。
正文中各品種項下規(guī)定的條件除固定相種類、流動相組分,、檢測器類型不得任意改變外,,其余如色譜柱內徑、長度,、固定相牌號,、載體粒度、流動相流速,、混合流動相各組分的比例,、柱溫、進樣量,、檢測器的靈敏度等,,均可適當改變
以適應具體品種并達到系統(tǒng)適用性試驗的要求。一般色譜圖約于20分鐘內記錄完畢,。2.系統(tǒng)適用性試驗
按各品種項下要求對儀器進行適用性試驗,,即用規(guī)定的對照品對儀器進行試驗和調整,應達到規(guī)定的要求,;或規(guī)定分析狀態(tài)下色譜柱的小理論板數(shù),、分離度和拖尾因子.
色譜柱的理論板數(shù) 在選定的條件下,注入供試品溶液或各品種項下規(guī)定的內標物質溶液,,記錄色譜,,量出供試品主成分或內標物質峰的保留時間t(R)和半高峰寬W(h/2),按n=5.54[t(R)╱W(h/2)]^2計算色譜柱的理論板數(shù),,如果測得理論板數(shù)低于各品種項下規(guī)定的小理論板數(shù),,應改變色譜柱的某些條件(如柱長、載體性能,、色譜柱充填的優(yōu)劣等),,使理論板數(shù)達到要求。
分離度 定量分析時,,為便于準確測量,,要求定量峰與其他峰或內標峰之間有較好的分離度。分離度(R)的計算公式為:R=2(tR2-tR1)/(W1+W2),, 式中 t(R2)為相鄰兩峰中后一峰的保留時間,; t(R1)為相鄰兩峰中前一峰的保留時間,; W1及W2為此相鄰兩峰的峰寬。除另外有規(guī)定外,,分離度應大于1.5,。
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