液相色譜系統(tǒng)主要由以下三個系統(tǒng)組成的
閱讀:1011 發(fā)布時間:2020-4-7
液相色譜系統(tǒng)由儲液器,、泵,、進樣器,、色譜柱,、檢測器、記錄儀等幾部分組成,。儲液器中的流動相被高壓泵打入系統(tǒng),樣品溶液經(jīng)進樣器進入流動相,被流動相載入色譜柱(固定相)內(nèi),由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù),在兩相中作相對運動時,經(jīng)過反復(fù)多次的吸附-解吸的分配過程,各組分在移動速度上產(chǎn)生較大的差別,被分離成單個組分依次從柱內(nèi)流出,通過檢測器時,樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號傳送到記錄儀,數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來液相色譜儀主要有進樣系統(tǒng),、輸液系統(tǒng)、分離系統(tǒng),、檢測系統(tǒng)和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng),,下面將分別敘述其各自的組成與特點。
1,、輸液系統(tǒng):該系統(tǒng)包括高壓泵,、流動相貯存器和梯度儀三部分。高壓泵的一般壓強為l.47~4.4X10Pa,,流速可調(diào)且穩(wěn)定,,當高壓流動相通過層析柱時,可降低樣品在柱中的擴散效應(yīng),,可加快其在柱中的移動速度,,這對提高分辨率、回收樣品,、保持樣品的生物活性等都是有利的,。流動相貯存器和梯度儀,可使流動相隨固定相和樣品的性質(zhì)而改變,,包括改變洗脫液的極性,、離子強度、PH值,,或改用競爭性抑制劑或變性劑等,。這就可使各種物質(zhì)都能獲得有效分離。
2、進樣系統(tǒng):液相色譜系統(tǒng)一般采用隔膜注射進樣器或高壓進樣間完成進樣操作,,進樣量是恒定的,。這對提高分析樣品的重復(fù)性是有益的。
3,、分離系統(tǒng):該系統(tǒng)包括色譜柱,、連接管和恒溫器等。色譜柱一般長度為10~50cm,,內(nèi)徑為2~5mm,,由"不銹鋼或厚壁玻璃管或鈦合金等材料制成,住內(nèi)裝有直徑為5~10μm粒度的固定相,。固定相中的基質(zhì)是由機械強度高的樹脂或硅膠構(gòu)成,,它們都有惰性、多孔性和比表面積大的特點,,加之其表面經(jīng)過機械涂漬,,或者用化學法偶聯(lián)各種基因或配體的有機化合物。因此,,這類固定相對結(jié)構(gòu)不同的物質(zhì)有良好的選擇性,。例如,在多孔性硅膠表面偶聯(lián)豌豆凝集素后,,就可以把成纖維細胞中的一種糖蛋白分離出來,。