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高效液相色譜儀的原理
閱讀：2244 發(fā)布時(shí)間：2020-3-11
高效液相色譜儀的原理：
分配系數(shù)與組分、流動相和固定相的熱力學(xué)性質(zhì)有關(guān),，也與溫度,、壓力有關(guān)。在不同的色譜分離機(jī)制中,，K有不同的概念：吸附色譜法為吸附系數(shù),，離子交換色譜法為選擇性系數(shù)（或稱交換系數(shù)），凝膠色譜法為滲透參數(shù),。但一般情況可用分配系數(shù)來表示,。
在條件（流動相、固定相、溫度和壓力等）一定,，樣品濃度很低時(shí)（Cs,、Cm很小）時(shí),，K只取決于組分的性質(zhì),，而與濃度無關(guān)。這只是理想狀態(tài)下的色譜條件,，在這種條件下,，得到的色譜峰為正常峰；在許多情況下,，隨著濃度的增大,，K減小，這時(shí)色譜峰為拖尾峰,；而有時(shí)隨著溶質(zhì)濃度增大,，K也增大，這時(shí)色譜峰為前延峰,。因此,，只有盡可能減少進(jìn)樣量，使組分在柱內(nèi)濃度降低,，K恒定時(shí),，才能獲得正常峰。
儀器使用：
高效液相色譜法只要求樣品能制成溶液,，不受樣品揮發(fā)性的限制,，流動相可選擇的范圍寬，固定相的種類繁多,，因而可以分離熱不穩(wěn)定和非揮發(fā)性的,、離解的和非離解的以及各種分子量范圍的物質(zhì)。
與試樣預(yù)處理技術(shù)相配合,，HPLC所達(dá)到的高分辨率和高靈敏度,，使分離和同時(shí)測定性質(zhì)上十分相近的物質(zhì)成為可能，能夠分離復(fù)雜相體中的微量成分,。隨著固定相的發(fā)展,，有可能在充分保持生化物質(zhì)活性的條件下完成其分離。
HPLC成為解決生化分析問題Z有前途的方法,。由于HPLC具有高分辨率,、高靈敏度、速度快,、色譜柱可反復(fù)利用,，流出組分易收集等優(yōu)點(diǎn),，因而被廣泛應(yīng)用到生物化學(xué)、食品分析,、醫(yī)藥研究,、環(huán)境分析、無機(jī)分析等各種領(lǐng)域,。高效液相色譜儀與結(jié)構(gòu)儀器的聯(lián)用是一個(gè)重要的發(fā)展方向。
液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)受到普遍重視,，如分析氨基甲酸酯農(nóng)藥和多核芳烴等,；液相色譜-紅外光譜聯(lián)用也發(fā)展很快，如在環(huán)境污染分析測定水中的烴類,，海水中的不揮發(fā)烴類,，使環(huán)境污染分析得到新的發(fā)展。
該儀器應(yīng)用非常廣泛,，幾乎遍及定量定性分析的各個(gè)領(lǐng)域,。
1、分離混合物：高效液相色譜法只要求樣品能制成溶液,，不受樣品揮發(fā)性的限制,，流動相可選擇的范圍寬，固定相的種類繁多,，因而可以分離熱不穩(wěn)定和非揮發(fā)性的,、離解的和非離解的以及各種分子量范圍的物質(zhì)。
通過與試樣預(yù)處理技術(shù)相配合,，高效液相色譜法所達(dá)到的高分辨率和高靈敏度,，可分離并同時(shí)測定性質(zhì)上十分相近的物質(zhì)，能夠分離復(fù)雜混合物中的微量成分,。并且隨著固定相的發(fā)展,，還可在充分保持生化物質(zhì)活性的條件下完成對其的分離。
2,、生化分析：由于高效液相色譜法具有高分辨率,、高靈敏度、速度快,、色譜柱可反復(fù)利用,，流出組分易收集等優(yōu)點(diǎn)，因而被廣泛應(yīng)用到生物化學(xué),、食品分析,、醫(yī)藥研究、環(huán)境分析,、無機(jī)分析等各種領(lǐng)域,，并已成為解決生化分析問題Z有前途的方法,。
3、儀器聯(lián)用：高效液相色譜儀與結(jié)構(gòu)儀器的聯(lián)用是一個(gè)重要的發(fā)展方向,。高效液相色譜一質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)受到普遍重視,，如分析氨基甲酸酯農(nóng)藥和多核芳烴等：高效液相色譜一紅外光譜聯(lián)用也發(fā)展很快，如在環(huán)境污染分析測定水中的烴類等．使環(huán)境污染分析得到新的發(fā)展,。