一,、消化

 

　　1、準(zhǔn)備6個凱氏燒瓶,，標(biāo)號,。1,、2、3號燒瓶中分別加入適當(dāng)濃度的蛋白溶液1.0mL,，樣品要加到燒瓶底部,，切勿沾在瓶口及瓶頸上。再依次加入硫酸鉀-硫酸銅接觸劑0.3g,，濃硫酸2.0mL,，30%過氧化氫1.0mL。4,、5,、6號燒瓶作為空白對照，用以測定試劑中可能含有的微量含氮物質(zhì),，對樣品測定進(jìn)行校正,。4、5,、6號燒瓶中加入蒸餾水1.0mL代替樣液,，其余所加試劑與1、2,、3號燒瓶相同,。

 

　　2、將加好試劑的各燒瓶放置消化架上,，接好抽氣裝置,。先用微火加熱煮沸，此時燒瓶內(nèi)物質(zhì)炭化變黑,，并產(chǎn)生大量泡沫,，務(wù)必注意防止氣泡沖出管口。待泡沫消失停止產(chǎn)生后,，加大火力,，保持瓶內(nèi)液體微沸,，至溶液澄清后,，再繼續(xù)加熱使消化液微沸15min。在消化過程中要隨時轉(zhuǎn)動燒瓶,，以使內(nèi)壁粘著物質(zhì)均能流入底部,，以保證樣品*消化。消化時放出的氣體內(nèi)含SO2,，具有強(qiáng)烈刺激性,，因此自始自終應(yīng)打開抽水泵將氣體抽入自來水排出。整個消化過程均應(yīng)在通風(fēng)櫥中進(jìn)行,。消化*后,，關(guān)閉火焰,，使燒瓶冷卻至室溫。

 

二,、蒸餾和吸收

 

　　蒸餾和吸收是在微量凱氏定氮儀內(nèi)進(jìn)行的,。凱氏定氮蒸餾裝置種類甚多，大體上都由蒸氣發(fā)生,、氨的蒸餾和氨的吸收三部分組成,。

 

　　儀器使用前，微量全部管道都須經(jīng)水蒸氣洗滌,，以除去管道內(nèi)可能殘留的氨,，正在使用的儀器,，每次測樣前，蒸汽洗滌5min即可。較長時間未使用的儀器,，重復(fù)蒸汽洗滌，不得少于三次,，并檢查儀器是否正常,。仔細(xì)檢查各個連接處，保證不漏氣,。

 

　　在一次蒸餾完畢后,，移去煤氣燈，夾緊蒸汽發(fā)生器與收集器間的橡膠管,，排除反應(yīng)完畢的廢液,，用水沖洗小玻杯幾次，并將廢液排除,。如此反復(fù)沖洗干凈后,，即可進(jìn)行下一個樣品的蒸餾。按以上方法用標(biāo)準(zhǔn)硫酸銨再做兩次,。另取2mL蒸餾水代替標(biāo)準(zhǔn)硫酸銨進(jìn)行空白測定二次,。將各次蒸餾的錐形瓶一起滴定。

 

三,、凱氏定氮儀滴定

 

　　樣品和空白蒸餾完畢后,，一起進(jìn)行滴定。

 

　　打開接受瓶蓋,，用酸式微量滴定管以0.0100mol/L的標(biāo)準(zhǔn)鹽酸溶液進(jìn)行滴定,。待滴至瓶內(nèi)溶液呈暗灰色時，用蒸餾水將錐形瓶內(nèi)壁四周淋洗一次,。若振搖后復(fù)現(xiàn)綠色,，應(yīng)再小心滴入標(biāo)準(zhǔn)鹽酸溶液半滴，振搖觀察瓶內(nèi)溶液顏色變化,，暗灰色在一二分鐘內(nèi)不變,，當(dāng)視為到達(dá)滴定終點(diǎn),。若呈粉紅色，表明已超越滴定終點(diǎn),，可在已滴定耗用的標(biāo)準(zhǔn)鹽酸溶液用量中減去0.02mL,，每組樣品的定氮終點(diǎn)顏色必須*一致,?？瞻讓φ找航邮芷績?nèi)的溶液顏色不變或略有變化尚未出現(xiàn)綠色，可以不滴定,。記錄每次滴定耗用標(biāo)準(zhǔn)鹽酸溶液毫升數(shù),，供計算用。