腦膜炎奈瑟菌A/C群(NM-AC熒光定量PCR試劑盒【檢驗原理】

本試劑盒采用探針法實時熒光 PCR 技術(shù),，設(shè)計一對腦膜炎奈瑟菌A/C群特異性引物,，結(jié)合一條特異性探針，用熒光 PCR 技術(shù)對腦膜炎奈瑟菌A/C群的核酸進(jìn)行體外擴增檢測，用于臨床上對病原學(xué)輔助診斷,。

【儲存條件及有效期】

-20℃±5℃，避光保存、運輸、反復(fù)凍融少于 7 次，有效期 12 個月,。

【適用儀器】

ABI ,、安捷倫 MX3000P/3005P,、LightCycler,、Bio-Rad、eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測儀。

說明：不同批號的試劑盒組分不可交互使用。

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1.1 結(jié)果判斷

陽性：檢測通道 Ct 值≤35.0,，且曲線有明顯的指數(shù)增長曲線。

可疑：檢測通道 Ct 值>35.0,，且出現(xiàn)典型擴增曲線的樣本建議重復(fù)試驗,，重復(fù)試驗結(jié)果出現(xiàn) Ct 值≤35.0 和典型擴增曲線者為陽性,，否則為陰性,。

陰性：樣本檢測結(jié)果無 Ct 值且無明顯的擴增曲線。

2. 檢測方法的局限性

a. 樣本檢測結(jié)果與樣本收集,、處理,、運送以及保存質(zhì)量有關(guān)；

b. 樣本提取過程中沒有控制好交叉污染,，會出現(xiàn)假陽性結(jié)果,；

c. 陽性對照、擴增產(chǎn)物泄漏,，會導(dǎo)致假陽性結(jié)果,；

d. 病原體在流行過程中基因突變、重組,，會導(dǎo)致假陰性結(jié)果,；

e. 不同的提取方法存在提取效率差異，會導(dǎo)致假陰性結(jié)果,；

f. 試劑運輸,，保存不當(dāng)或試劑配制不準(zhǔn)確引起的試劑檢測效能下降，出現(xiàn)假陰性或定量檢測不準(zhǔn)確的結(jié)果,；

g. 本檢測結(jié)果僅供參考,，如須確診請結(jié)合臨床癥狀以及其他檢測手段。

3. 質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)

陰性質(zhì)控品：無明顯擴增曲線或無 Ct 值顯示,；

陽性質(zhì)控品：擴增曲線有明顯指數(shù)生長期,，且 Ct 值≤32； 以上條件應(yīng)同時滿足,，否則實驗視為無效,。

1.1 DNA 提取

1) 對上述處理好的標(biāo)本加入等體積核酸提取液（固體標(biāo)本加入50μL 核酸提取液）， 100℃恒溫處理 10min,，13,000 rpm 離心 5min,，取上清液轉(zhuǎn)移至新的 1.5mL EP 管，-20℃保存,；

2) DNA 的提取也可以采用上海晅科生物科技有限公司生產(chǎn)的DNA 提取試劑盒（離心柱提取法）,，請嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。

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