牛支原體（MYPB）熒光PCR核酸檢測(cè)試劑盒針對(duì)牛支原體（MYPB）基因高度保守區(qū)基因序列設(shè)計(jì)特異性引物和熒光探針,。在反應(yīng)體系中含牛支原體（MYPB）基因組模板的情況下,，PCR反應(yīng)得以進(jìn)行并釋放 熒光信號(hào),。利用熒光定量PCR儀對(duì)PCR過(guò)程中相應(yīng)通道的信號(hào)強(qiáng)度進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)和輸出,，實(shí)現(xiàn)檢測(cè)結(jié)果的定性,、定量分析。

牛支原體（MYPB）熒光PCR核酸檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書

【產(chǎn)品名稱】

通用名稱：牛支原體（MYPB）核酸擴(kuò)增檢測(cè)試劑盒(PCR 熒光探針?lè)?

Name ：Mycoplasma bovis (MYPB) nucleic acid amplification kit (PCR fluorescence probe method)

【包裝規(guī)格】48T/盒

【預(yù)期用途】

本試劑盒適用于檢測(cè)全血等樣本中的牛支原體（MYPB）,，用于牛支原體（MYPB）感染的輔助診斷,，其檢測(cè)結(jié)果僅供參考。

【檢驗(yàn)原理】

本試劑盒用一對(duì)牛支原體（MYPB）特異性引物,，結(jié)合一條特異性探針,，用熒光PCR 技術(shù)對(duì)牛支原體（MYPB）的核酸進(jìn)行體外擴(kuò)增檢測(cè)，用于臨床上對(duì)可疑感染者的病原學(xué)診斷,。

【儲(chǔ)存條件和有效期】

試劑盒保存于-20±5℃,，有效期 12 個(gè)月；

避免反復(fù)凍融,，凍融次數(shù)不超過(guò) 5 次,；試劑開瓶后，在室溫條件下放置時(shí)間不應(yīng)超過(guò) 8 小時(shí),；運(yùn)輸采用干冰（或者冰袋）保持低溫,，運(yùn)輸時(shí)間不應(yīng)超過(guò) 4 天。試

劑盒生產(chǎn)日期見產(chǎn)品標(biāo)簽,。

【標(biāo)本要求】

標(biāo)本采集：用注射器取血 5mL 至 EDTA-2Na 抗凝管

保存運(yùn)輸：上述標(biāo)本短期內(nèi)可保存于-20℃,，長(zhǎng)期保存可置-70℃，但不能超過(guò)6 個(gè)月,，標(biāo)本運(yùn)送應(yīng)采用 2~8℃冰袋運(yùn)輸,，嚴(yán)禁反復(fù)凍融,。

【使用方法】

1. 樣品處理（樣本處理區(qū)）

1.1樣本前處理

取抗凝血下層血細(xì)胞 50uL，加入 100uL 雙蒸水吹勻

1.2DNA 提取

1) 對(duì)上述處理好的標(biāo)本加入等體積核酸提取液（固體標(biāo)本加入50uL核酸提取液）,，

100℃恒溫處理 10 分鐘,，13,000 rpm 離心 5 分鐘，取上清液轉(zhuǎn)移至新的 1.5ml

EP 管,，-20℃保存,；

2) DNA 的提取也可以采用上海晅科生物科技有限公司生產(chǎn)的 DNA 提取試劑

盒（離心柱提取法），請(qǐng)嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行操作,。

2. 試劑配制（試劑準(zhǔn)備區(qū)）

根據(jù)待檢測(cè)樣本總數(shù),，設(shè)所需要的 PCR 反應(yīng)管管數(shù)為 N(N=樣本數(shù)+1 管陰性

對(duì)照+1 管陽(yáng)性對(duì)照；樣品每滿 7 份,，多配制 1 份),，每測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表：

0152甲型流感病毒N1亞型(IAV-N1)核酸檢測(cè)試劑盒(RT-P48T

0132甲型流感病毒H3亞型(IAV-H3)核酸檢測(cè)試劑盒(RT-P48T

0122甲型流感病毒H1亞型(IAV-H1)核酸檢測(cè)試劑盒(RT-P48T

0114豬流感(SIV)核酸檢測(cè)試劑盒(RT-PCR法)48T

0112甲型流感病毒(IAV)核酸檢測(cè)試劑盒(RT-PCR法)48T

0151甲型流感病毒H1N1 2009型(IAV-H1N1 200948T

3. 加樣（樣本處理區(qū)）

將步驟 1 提取的 DNA,、陽(yáng)性質(zhì)控品,、陰性質(zhì)控品各取 4μl，分別加入相應(yīng)的反應(yīng)管中,，蓋好管蓋,，混勻，短暫離心,。

5. 結(jié)果分析判定

5.1結(jié)果分析條件設(shè)定

設(shè)置 Baseline 和 Threshold：一般直接按機(jī)器自動(dòng)分析的結(jié)果分析,，當(dāng)曲線出

現(xiàn)整體傾斜時(shí)，根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié) Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范圍

內(nèi)調(diào)節(jié)),、stop 值(一般可在 5~20 范圍內(nèi)調(diào)節(jié)),，以及 Threshold 的 Value 值(上

下拖動(dòng)閾值線至高于陰性對(duì)照)，重新分析結(jié)果,。

8. 產(chǎn)品性能指標(biāo)

陰陽(yáng)性參考品符合率：8 份陽(yáng)性參考品符合率為 100％,；10 份陰性參考品符合

率為 100％。

低檢測(cè)限：2.0×102copies/ml,。

4. PCR 擴(kuò)增（核酸擴(kuò)增區(qū)）

4.1 將待檢測(cè)反應(yīng)管置于熒光定量 PCR 儀反應(yīng)槽內(nèi),；

4.2 設(shè)置好通道、樣品信息,，反應(yīng)體系設(shè)置為 25ul,；

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