禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增殖病病毒REV熒光PCR試劑盒適用于檢測的血清或血漿,、脾臟、肝臟,、腎臟,、疑似污染REV的活病毒疫苗等標本中禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增殖病病毒RNA，禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增殖病病毒感染的輔助診斷,。
本試劑盒用一對禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增殖病病毒特異性引物,，結(jié)合一條特異性熒光探針，用一步法熒光RT-PCR技術(shù)對禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增殖病病毒RNA進行體外擴增檢測,，用于臨床上對可疑感染者的病原學診斷,。

禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增殖病病毒REV熒光PCR試劑盒說明書

【產(chǎn)品名稱】

商品名稱：禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增殖病病毒（REV）核酸檢測試劑盒(RT-PCR 熒光探針法)

Name ：Diagnostic Kit for Reticuloen-dotheliosis Virus RNA (RT-PCR Fluorescence Probing)

【包裝規(guī)格】48 份/盒

【預(yù)期用途】

本試劑盒適用于檢測的血清或血漿、脾臟,、肝臟,、腎臟、疑似污染REV的活病

毒疫苗等標本中禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增殖病病毒RNA,，適用于禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增殖病病

毒感染的輔助診斷,。其檢測結(jié)果僅供參考。

【檢驗原理】

本試劑盒用一對禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增殖病病毒特異性引物,，結(jié)合一條特異性熒光

探針,，用一步法熒光RT-PCR技術(shù)對禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增殖病病毒RNA進行體外擴

增檢測，用于臨床上對可疑感染者的病原學診斷,。

【試劑組成】

名 稱 規(guī) 格

酶液 50μl×1 管

REV 反應(yīng)液 1.0ml×1 管

REV 陽性質(zhì)控品 50μl ×1 管

陰性質(zhì)控品 250μl ×1 管

說明：不同批號的試劑盒組分不可交互使用,。

【儲存條件及有效期】

-20℃±5℃，避光保存,、運輸,、反復(fù)凍融少于 5 次，

有效期 12 個月,。

【適用儀器】

ABI 7300,、7500、ABI stepone / stepone plus ,、安捷倫 MX3000P/3005P,、MJ

Opticon2 等其他熒光定量 PCR 檢測儀,。

【標本采集】

疑似病雞的血清或血漿；疑似病雞的脾臟,、肝臟,、腎臟；疑似污染 REV 的活病毒

疫苗,。

【保存和運輸】

上述標本短期內(nèi)可保存于-20℃,，長期保存可置-70℃，但不能超過 6 個月,，標

本運送應(yīng)采用 2~8℃冰袋運輸,，嚴禁反復(fù)凍融。

【使用方法】

1. 樣品處理（樣本處理區(qū)）

1.1樣本前處理

疑似病雞的血清或血漿,，采集后經(jīng)處理立即用于接種雞胚成纖維細胞(CEF)或-70℃

保存,；疑似病雞的脾臟、肝臟,、腎臟,，采集后立即研磨成懸浮液，-70℃保存,；疑似

污染 REV 的活病毒疫苗,，在用于分離病毒前，必須保存于相應(yīng)疫苗規(guī)定的條件下,。,。

1.2RNA 提取

推薦采用上海晅科生物科技有限公司生產(chǎn)的 RNA 提取試劑盒（離心柱提取

法），請按照試劑盒說明書進行操作,。

2. 試劑配制（試劑準備區(qū)）

根據(jù)待檢測樣本總數(shù),，設(shè)所需要的 PCR 反應(yīng)管管數(shù)為 N(N=樣本數(shù)+1 管陰性

對照+1 管陽性對照；樣品每滿 7 份,，多配制 1 份),，每測試反應(yīng)體系配制如下表：

試劑 REV 反應(yīng)液 酶液

用量 20μl 1μl

3. 加樣（樣本處理區(qū)）

將步驟 1 提取的 RNA、陽性質(zhì)控品,、陰性質(zhì)控品各取 4μl,，分別加入相應(yīng)的反

應(yīng)管中，蓋好管蓋,，混勻,，短暫離心。

4. PCR 擴增（核酸擴增區(qū)）

4.1將待檢測反應(yīng)管置于熒光定量 PCR 儀反應(yīng)槽內(nèi),；

4.2設(shè)置好通道、樣品信息,，反應(yīng)體系設(shè)置為 25ul,；熒光通道選擇：

檢測通道（Reporter Dye）FAM， 淬滅通道（Quencher Dye）NONE，請勿

選擇 ROX 參比熒光,。

4.3推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置：

步驟 循環(huán)數(shù) 溫度 時間 收集熒光信號

1 1cycle 42℃ 20min 否

2 1 cycle 95℃ 10min 否

3 40 cycle

94℃ 15sec 否

55℃ 30sec 是

5. 結(jié)果分析判定

5.1結(jié)果分析條件設(shè)定

設(shè)置 Baseline 和 Threshold：一般直接按機器自動分析的結(jié)果分析,，當曲

線出現(xiàn)整體傾斜時，根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié) Baseline 的 start 值(一般可在 3~15

范圍內(nèi)調(diào)節(jié)),、stop 值(一般可在 5~20 范圍內(nèi)調(diào)節(jié)),，以及 Threshold 的 Value

值(上下拖動閾值線至高于陰性對照)，重新分析結(jié)果,。

5.2結(jié)果判斷

陽性：檢測通道 Ct 值≤35.0,，且曲線有明顯的指數(shù)增長曲線；

可疑：檢測通道 35.0<Ct 值≤37,，建議重復(fù)檢測,，如果檢測通道仍為 35.0<Ct

值≤37，且曲線有明顯的增長曲線,，判定為陽性,，否則為陰性；

陰性：樣本檢測結(jié)果 Ct 值>37 或無 Ct 值,。

7. 質(zhì)控標準

陰性質(zhì)控品：無明顯擴增曲線或無 Ct 值顯示,；

陽性質(zhì)控品：擴增曲線有明顯指數(shù)生長期，且 Ct 值≤32,；

以上條件應(yīng)同時滿足,，否則實驗視為無效。

8. 產(chǎn)品性能指標

陰陽性參考品符合率：5 份陽性參考品符合率為 100％,；10 份陰性參考品符合率

為 100％,。

低檢測限：5.0×102copies/ml。

精密度：批內(nèi),、批間精密度檢測 Ct 值的變異系數(shù)（CV）均小于等于 3%,。

 

禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增殖病病毒REV熒光PCR試劑盒相關(guān)產(chǎn)品：

1611亨德拉病毒(EMV)核酸檢測試劑盒 48T

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