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【產品名稱】

商品名稱：A 族鏈球菌（GAS）核酸檢測試劑盒（熒光 PCR 法）

Name：Diagnostic Kit for Group A streptococcus DNA（Real-Time PCR Method）

【包裝規(guī)格】25T/盒,、50T/盒

【預期用途】

本試劑盒適用于檢測全血等樣本中的 A 族鏈球菌,，用于 A 族鏈球菌感染的輔助診斷,，其檢測結果僅供參

考。

【檢驗原理】

本試劑盒采用 TaqMan 探針法實時熒光 PCR 技術,，設計一對 A 族鏈球菌特異性引物,，結合一條特異性探針，用熒光 PCR 技術對 A 族鏈球菌的 DNA 進行體外擴增檢測,，用于臨床上對可疑感染者的病原學診斷,。

【試劑組成】

包裝規(guī)格25T/盒50T/盒

GAS 反應液500μL×1 管500μL×2 管

酶液25μL×1 管50μL×1 管

GAS 陽性質控品250μL ×1 管250μL ×1 管

陰性質控品250μL ×1 管250μL ×1 管

說明：不同批號的試劑盒組分不可交互使用。

【儲存條件及有效期】

-20℃±5℃,，避光保存,、運輸、反復凍融次數(shù)不超過 5 次,，有效期 12 個月,。

【適用儀器】

ABI7500、安捷倫 MX3000P/3005P,、LightCycler,、Bio-Rad、Eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測儀,。

【標本采集】

用注射器取血 5mL 至 EDTA-2Na 抗凝管,。

【保存和運輸】

采集或處理好的樣品在 2℃~8℃條件下保存應不超過 24 h；若需長期保存,，應放置-70℃以下保存,，凍融不超過 3 次。

【使用方法】

1.樣品處理（樣本處理區(qū)）

1.1樣本前處理

取抗凝血下層血細胞 50μL,，加入 100μL 雙蒸水吹勻,。

1.2核酸提取

推薦采用上海晅科生物科技有限公司生產的核酸提取試劑（離心柱法）進行核酸提取，請按照試劑說明書進    行操作,。

2.試劑配制（試劑準備區(qū)）

根據(jù)待檢測樣本總數(shù),，設所需要的 PCR 反應管管數(shù)為 N（N=樣本數(shù)+1 管陰性對照+1 管陽性對照；反應管數(shù)每滿 10 份,，多配制 1 份）,，每測試反應體系配制如下表：

試劑GAS 反應液酶液

用量（樣本數(shù)為 N）19μL1μL

將混合好的測試反應液分裝到 PCR 反應管中，20μL/管,。

3.加樣（樣本處理區(qū)）

將步驟 1 提取的核酸,、陽性質控品、陰性質控品各取 5μL,，分別加入相應的反應管中,，蓋好管蓋，混勻,， 短暫離心,。

4.PCR 擴增（核酸擴增區(qū)）

4.1將待檢測反應管置于熒光定量 PCR 儀反應槽內,；

4.2設置好通道、樣品信息,，反應體系設置為 25μL,；

熒光通道選擇： 檢測通道（Reporter Dye）FAM， 淬滅通道（Quencher Dye）NONE,，ABI 系列儀器請勿選擇 ROX 參比熒光,，選擇 None 即可。

4.3推薦循環(huán)參數(shù)設置：

步驟循環(huán)數(shù)溫度時間收集熒光信號

11 cycle95℃2min否

245 cycles95℃15sec否

60℃30sec是

5.結果分析判定

5.1結果分析條件設定（請參照各儀器使用說明書進行設置,，以分析 ABI7500 儀器為例）

反應結束后自動保存結果,，根據(jù)分析后圖像調節(jié) Baseline 的 Start 值、End 值以及 Threshold 值（用戶可根據(jù)實際情況自行調整,，Start 值可設在 3～15,、End 值可設在 5～20，使閾值線位于擴增曲線指數(shù)期,，陰性質控品的擴增曲線平直或低于閾值線）,，點擊 Analyze 自動獲得分析結果。

5.2結果判斷

陽性：檢測通道 Ct 值≤40,，且曲線有明顯的指數(shù)增長曲線,； 陰性：樣本檢測結果無 Ct 值，且無特異性擴增曲線,；

可疑：樣本檢測結果 40＜Ct 值≤45,，建議重復檢測，如果檢測通道仍為 40<Ct 值≤45,，且曲線有明顯的增長曲線,，判定為陽性，否則為陰性,。

5.3質控標準

陰性質控品：無特異性擴增曲線或無 Ct 值顯示,；

陽性質控品：擴增曲線有明顯指數(shù)增長期，且 Ct 值≤32,； 以上條件應同時滿足，否則實驗視為無效,。

6.檢測方法的局限性

1.樣本檢測結果與樣本收集,、處理、運送以及保存質量有關,；

2.樣本提取過程中沒有控制好交叉污染,，會出現(xiàn)假陽性結果；

3.陽性對照,、擴增產物泄漏,，會導致假陽性結果,；

4.病原體在流行過程中基因突變、重組,，會導致假陰性結果,；

5.不同的提取方法存在提取效率差異，會導致假陰性結果,；

6.試劑運輸,，保存不當或試劑配制不準確引起的試劑檢測效能下降，出現(xiàn)假陰性或定量檢測不準確的結果,；

7.本檢測結果僅供參考,，如須確診請結合臨床癥狀以及其他檢測手段。

【注意事項】

1.所有操作嚴格按照說明書進行,；

2.試劑盒內各種組分使用前應自然融化,，完-全混勻并短暫離心；

3.反應液應避光保存,；

4.反應中盡量避免氣泡存在,，管蓋需蓋緊；

5.使用一次性吸頭,、一次性手套和各區(qū)專用工作服,；

6.樣本處理、試劑配制,、加樣需在不同區(qū)進行,，以免交叉污染；

7.實驗完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺和移液器,；

8.試劑盒里所有物品應視為污染物對待,，并按照《微生物生物醫(yī)學實驗室生物安全通則》進行處理。