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小鼠淋巴結內(nèi)皮細胞

（SVEC4-10）

細胞介紹

SVEC4-10 是通過 SV40（菌株 4A）轉(zhuǎn)化腋窩淋巴結血管的內(nèi)皮細胞衍生的內(nèi)皮細胞系。在沒有特殊添加劑的情況下無限生長，并且分化良好,，像正常內(nèi)皮細胞一樣對一些白細胞介素和細胞外基質(zhì)信號作出反應,，以進行管狀分化,。

當在合成基底膜上生長時,，SVEC4-10 會形成分支管狀網(wǎng)絡。SVEC4-10生長在類似于合成基底的膜上時,，它會形成管狀分支網(wǎng)絡,。它們在體外與小鼠淋巴細胞特異性結合。細胞表達細胞表面主要組織相容性復合體I類抗原H-2 k,，易被抗SV40 H-2 k CTL克隆裂解,。干擾素γ(ifn -γ)誘導MHC II類抗原在一個與正常內(nèi)皮細胞相同的時間過程中表達。細胞表達血管細胞粘附分子(VCAM),，對sv40t抗原呈陽性染色,。腫瘤壞死因子(TNF -)誘導SVEC4-10向梭形形態(tài)可逆轉(zhuǎn)變,。

細胞特性

1）來源：小鼠 輔助淋巴結; 血管上皮

2）形態(tài)：上皮細胞樣, SV40轉(zhuǎn)染 貼壁生長

3）含量：>1x106  細胞數(shù)

4）規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5)  用途：僅供科研使用。

運輸和保存：干冰運輸及復蘇好存活細胞：（1）1mL凍存管包裝干冰運輸,，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復蘇,，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落,、破損及細胞有污染,，請立即與我們聯(lián)系。（2）T25瓶復蘇的存活細胞常溫發(fā)貨,，收到后按照細胞接收后的處理方法操作,。

細胞接收后的處理：

1）收到細胞后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損,、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時聯(lián)系我們,。 

2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態(tài)，同時給剛收到的細胞拍照（10×,，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,，作為售后時收到時細胞狀態(tài)的依據(jù)。

3）貼壁細胞：細胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h,，顯微鏡下觀察細胞的生長和貼壁情況,，有些貼壁細胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下,，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細胞需要離心回收,，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的完-全培養(yǎng)基6-8mL，放到細胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng),。若細胞生長密度達70%-80%以上,，可以對細胞進行傳代處理。傳代過程中,，若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收,。

4）備注：運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完-全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞,。  收到細胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代 ,。                       

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1）準備DMEM培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清,，10%,；雙抗，1%,。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣,，95%,；二氧化碳，5%,。 溫度：37攝氏度,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清,，10%DMSO,，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二．細胞處理：

1）凍存細胞的復蘇：：

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入到含4-6mL完-全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻,。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液,，完-全培養(yǎng)基重懸細胞,。然后將細胞懸液加入含6-8ml完-全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度,。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL,，T75瓶2-3mL）,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細胞可以適當延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,，若細胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化,。 

3.輕輕打勻后吸出,，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液,，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完-全培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力,，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進行,。

3）細胞凍存: 收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用。下面T25瓶為例,；

1. 細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中,，可使用血球計數(shù)板計數(shù)，來決定細胞的凍存密度,。一般細胞的推薦凍存密度為1×106~1×107個活細胞/ml.

2. 1000rpm離心3-5min,，去掉上清,。用配制好的細胞凍存液重懸細胞 ，按每1ml凍存液含1×106~1×107個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中,，標注好名稱,、代數(shù)、日期等信息,。

3. 將要凍存的細胞置于程序降溫盒中,，-80度冰箱中過夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存,。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用,。

注意事項： 

1. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作,，并請注意防護,，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

2. 建議在復蘇凍存細胞時始終使用防護手套,、衣服和戴上防護面罩,。注意：凍存管浸沒在液氮中會泄漏，并會慢慢充滿液氮,。解凍時,，液氮轉(zhuǎn)化成氣相可能導致容器爆炸或用危險力吹掉其蓋子，從而產(chǎn)生飛揚的碎屑造成人員傷害,。