探討小動(dòng)物肢體協(xié)調(diào)性的圓筒實(shí)驗(yàn)及水平樓梯實(shí)驗(yàn)方法

一.圓筒實(shí)驗(yàn)方法（Rearing Cylinder）

圓筒試驗(yàn)是針對(duì)于不對(duì)稱(chēng)中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的研究工具,。主要研究嚙齒類(lèi)動(dòng)物在貼壁站立的過(guò)程中肢體不對(duì)稱(chēng)使用的情況。本試驗(yàn)對(duì)神經(jīng)退行性疾病的模型,，如帕金森,，ALS，阿爾茨海默氏癥,，中風(fēng)有重要意義,。

此檢測(cè)需要將小鼠放置在一個(gè)透明的有機(jī)玻璃圓筒內(nèi)，觀察動(dòng)物在直立狀態(tài)下使用上肢的偏好,。一般而言,，小鼠在正常狀態(tài)下多會(huì)使用雙上肢碰觸攀爬圓筒壁以作出探索行為，但損傷后使用傷側(cè)肢體的頻率會(huì)明顯下降,，因而可以通過(guò)評(píng)估損傷側(cè)肢體的使用頻率和意愿反應(yīng)小鼠的恢復(fù)狀況,。動(dòng)物將會(huì)被放置在透明有機(jī)玻璃的圓筒狀里（15 cm × 20 cm：D × H），一共 15 min,，全程錄像,，圓筒后面設(shè)置玻璃以獲取動(dòng)物背對(duì)攝像機(jī)時(shí)的情形。每次動(dòng)物直立狀態(tài)下上肢接觸圓筒壁完成（雙上肢放回地面為標(biāo)記）記為一組,。一共分析前 10 組,，長(zhǎng)分析時(shí)程為 15min。實(shí)驗(yàn)正式開(kāi)始前三天動(dòng)物會(huì)被放置到圓筒里適應(yīng) 15～20min,，并接受基線(xiàn)檢測(cè),。

Rearing 分析結(jié)果使用*攀爬和序貫攀爬表示，每次攀爬動(dòng)物都會(huì)面臨使用哪側(cè)肢體的選擇,，故存在*攀爬（左,、右、雙側(cè)）和序貫攀爬（左、右,、雙側(cè)）三種不同的結(jié)果,。

定義：

*攀爬（initial rear）：動(dòng)物直立后diyi次使用上肢攀爬圓筒壁的行為，每次肢體直立（Rearing session）后只存在一次*攀爬（只記一分）,，記錄每個(gè) session*攀爬的時(shí)間便于后期檢查,。

左側(cè)：使用左上肢碰觸攀爬；

右側(cè)：使用右上肢攀爬碰觸,；

雙側(cè)：同時(shí)使用兩側(cè)上肢攀爬,，如果肢體前后放置到圓筒壁的時(shí)間>  0.25 秒，則認(rèn)為是雙側(cè) rear,。

序貫攀爬（subsequential  rear）：動(dòng)物在*攀爬后繼續(xù)對(duì)圓筒壁做出的探索攀爬行為,。同樣面臨三種選擇，左,、右,，雙側(cè)，每次序貫攀爬的完成均記一分,，可能存在> 1 分的情況,。

若*攀爬被定義為左，則序貫攀爬只能是左或者雙側(cè),；

若*攀爬被定義為右,，則序貫攀爬只能是右或者雙側(cè)；

若*攀爬被定為為雙,，則序貫攀爬只能被定義為雙側(cè),；

左側(cè)：在*攀爬后動(dòng)物繼續(xù)使用左側(cè)上肢攀爬圓筒壁的行為，每次使用均記一分,，若右上肢在左上肢之后碰觸了圓筒壁則記為雙側(cè),；

右側(cè)：在*攀爬后動(dòng)物繼續(xù)使用右側(cè)上肢攀爬圓筒壁的行為，每次使用均記一分,，若左上肢在右上肢之后碰觸了圓筒壁則記為雙側(cè),；

雙側(cè)：每次序貫攀爬中雙側(cè)上肢繼續(xù)攀爬圓筒壁的行為，序貫雙側(cè)可以發(fā)生在任何類(lèi)型的*攀爬和序貫攀爬之后,，該類(lèi)型攀爬可以是交替使用雙上肢亦可以是同時(shí)使用雙上肢,。在非輪流的情況下，連續(xù)發(fā)生的單側(cè)肢體碰觸攀爬不計(jì)為單側(cè)或雙側(cè)的序貫攀爬,。一旦被記為序貫雙側(cè),，則接下來(lái)所有的序貫碰觸只能繼續(xù)是序貫碰觸而非左或右側(cè)碰觸。 不記錄所有下降過(guò)程中的攀爬碰觸,，除非動(dòng)物未*低頭又發(fā)生了至少一次攀爬,。

二.水平樓梯實(shí)驗(yàn)（Horizontal Ladder）

該測(cè)試反應(yīng)小鼠肢體在水瓶樓梯上的行走控制能力,。水平橫梯跑道（100 cm × 13 cm：L × W）由兩塊有機(jī)玻璃組成，橫梯間隔 1 cm,。動(dòng)物飼養(yǎng)籠放置于跑道末端促使動(dòng)物通過(guò)橫梯跑道回籠,。每次實(shí)驗(yàn)前將在整條跑道中隨機(jī)抽掉 25 根橫梯制成無(wú)規(guī)律間隔跑道（大間隔 4cm），并使用攝像機(jī)記錄跑步情況,，每次檢測(cè)需要重復(fù)奔跑 5 次,。之后逐幀分析肢體踩空和滑落橫梯的情況，計(jì)算出小鼠錯(cuò)誤步數(shù)的比例,。