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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
詳細(xì)介紹
豬偽狂犬病毒gB蛋白抗體檢測(cè)試劑盒
介紹
豬偽狂犬病毒（Pseudorabies virus,PRV）抗體檢測(cè)試劑盒用于檢測(cè)豬血清中的PRV抗體,，評(píng)估養(yǎng)豬場(chǎng)豬偽狂犬病毒疫苗免疫狀況及感染豬的血清學(xué)輔助診斷,。
豬偽狂犬病毒gB蛋白抗體檢測(cè)試劑盒本試劑盒采用間接ELISA法,，在酶標(biāo)板條微孔上預(yù)包被純化的豬偽狂犬病毒gB抗原,。在試驗(yàn)中,，加入稀釋后的待檢血清，經(jīng)過溫育后,，若樣品中含有PRV特異性抗體,，則與包被板上的抗原結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗體和其他成分后,；再加入酶標(biāo)二抗,，與檢測(cè)板上的抗原抗體復(fù)合物發(fā)生特異性結(jié)合；再經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶結(jié)合物,；在微孔中加入TMB底物液,，經(jīng)酶催化形成藍(lán)色產(chǎn)物，加入終止液終止反應(yīng)后,，用酶標(biāo)儀450nm波長測(cè)定反應(yīng)孔中的吸光度A值,。
組份
1 | 抗原預(yù)包被板條 | 1/2塊 | 7 | 陰性對(duì)照 | 0.8/1.6ml |
2 | 酶結(jié)合物 | 6/11ml | 8 | 陽性對(duì)照 | 0.8/1.6ml |
3 | 10倍濃縮洗滌液 | 50/100ml | 9 | 血清稀釋板 | 1/2塊 |
4 | 顯色液 | 11/22ml | 10 | 封板膜 | 2/4張 |
5 | 樣本稀釋液 | 50/100ml | 11 | 說明書 | 1份 |
6 | 終止液 | 6/11ml |
需自備的設(shè)備及試劑
1. 微量移液器： 0.5μl-10μl、10μl-100μl,、100μl-1000μl,。
2. 一次性移液器吸頭。
3. 量筒：500ml,。
4. 96孔板酶標(biāo)儀,。
5. 蒸餾水或去離子水。
6. 洗瓶或洗板機(jī),。
樣品制備
取動(dòng)物全血,，按常規(guī)方法制備血清，要求血清清亮,，無溶血,。
洗滌液的準(zhǔn)備
濃縮洗滌液使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫，如有鹽結(jié)晶,，搖動(dòng)使結(jié)晶的鹽溶解,，然后用蒸餾水或去離子水作10倍稀釋。稀釋好的洗滌液可在4℃存放一周左右,。
樣品的稀釋
在血清稀釋板中按1：100的體積比稀釋待檢血清,。
注意：陰性和陽性對(duì)照不用稀釋。取每個(gè)樣品后都要更換吸頭,，準(zhǔn)確記錄每個(gè)樣品在板上的位置,。每個(gè)樣品在加入到包被板微孔前應(yīng)充分混勻。
注意事項(xiàng)
1. 試劑盒使用前各試劑應(yīng)平衡至室溫,，應(yīng)將試劑盒各組份放置室溫至少1小時(shí)以上,。使用前應(yīng)搖勻，使用后放回2-8℃。
2. 不同品種,、不同批號(hào)試劑盒的試劑組分不得混用,，使用試劑時(shí)應(yīng)防止試劑污染。
3. 底物和終止液對(duì)皮膚和眼可能有刺激性,，使用時(shí)應(yīng)該注意防護(hù),。
4. TMB（顯色液）不要暴露于強(qiáng)光和避免接觸氧化劑。
5. 檢測(cè)板拆封后應(yīng)避免受潮或沾水(未用完的抗原包被板加干燥劑放于自封袋中,，并盡快置于2-8℃),。
6. 所有廢棄物在丟棄之前應(yīng)合理處理以免污染。
7. 嚴(yán)格遵守操作說明可以獲得*的結(jié)果,。操作過程中移液,、定時(shí)和洗滌等的全部過程必須精確。
8. 血清稀釋板為一次性用品,，不得重復(fù)使用,；血清稀釋板的*容量為300μl/孔。
操作步驟
1. 取預(yù)包被的檢測(cè)板（根據(jù)樣品*,，可拆開分次使用）,，將稀釋好的待檢血清取100μl加入到檢測(cè)板孔中。同時(shí)設(shè)陰性對(duì)照1孔,，陽性對(duì)照2孔,，取陰性及陽性對(duì)照各100μl分別加入反應(yīng)孔中輕輕振勻孔中樣品（勿溢出）。
2. 蓋上封板膜（可按實(shí)際需要自行裁剪）,，置37℃溫育30分鐘,。
3. 小心揭開封板膜，甩掉板孔中的溶液,，使用工作濃度洗滌液每孔加250ul,，后甩去孔內(nèi)液體，以上步驟重復(fù)4-6次,，*在干凈吸水紙上拍干,。
4. 每孔加酶結(jié)合物50μl，蓋上封板膜,，置37℃溫育30分鐘,。
5. 小心揭開封板膜，甩掉板孔中的溶液,，洗滌4-6次, 方法同3,。切記*在干凈吸水紙上拍干。
6. 每孔加顯色液100μl,，輕微震蕩混勻,、蓋上封板膜37℃閉光顯色10分鐘,。
7. 每孔加終止液50μl，使反應(yīng)終止,，10分鐘內(nèi)測(cè)定結(jié)果,。
結(jié)果判定
用酶標(biāo)儀于450nm（630nm作參比波長）讀取吸光度OD值。
試驗(yàn)成立的條件是：
陰性對(duì)照（N）OD值<0.2,，同時(shí)陽性對(duì)照（P）OD值>0.4。
計(jì)算方法：
樣品OD值÷陽性對(duì)照OD均值=S/P值
陰陽性判斷：
S/P值≥0.5判斷為陽性,；
S/P值<0.5判斷為陰性,。
貯存方法： 2 - 8oC下貯存。
有效期： 12個(gè)月,。