您好, 歡迎來到化工儀器網(wǎng)
6
產(chǎn)品簡介
詳細介紹
豬鏈球菌(通用型,、2型）檢測試劑盒
【產(chǎn)品名稱】
通用名稱：豬鏈球菌(通用型、2型）檢測試劑盒（雙色實時熒光PCR法）
英文名稱：Streptococcus suis and Streptococcus suis serotype 2 Detecting Kit (Dual Channel Real-Time PCR Method)
【包裝規(guī)格】 25T/盒 ＆ 50T/盒
【預(yù)期用途】
豬鏈球菌(通用型,、2型）檢測試劑盒本試劑盒利用實時熒光PCR原理,，依據(jù)豬鏈球菌*基因及2型豬鏈球菌*基因定性篩查檢測豬鏈球菌，對豬鏈球菌2型及其他豬鏈球菌引起的相關(guān)病癥的診斷及療效評估有重要指導(dǎo)意義,。
【檢驗原理】
本試劑盒針對豬鏈球菌（SS）基因及2型豬鏈球菌（SS2）設(shè)計特異性引物和探針,，在反應(yīng)體系中含有豬鏈球菌DNA模板的情況下，PCR反應(yīng)得以進行并釋放熒光信號,。利用儀器 對PCR過程中相應(yīng)通道的信號強度進行實時監(jiān)測和輸出,，實現(xiàn)檢測結(jié)果的定性分析。
【主要組成成份】
序號 | 組成 | 25T/盒 | 50T/盒 |
1 | SS,、SS2 PCR反應(yīng)液 | 437.5μL×1管 | 875μL×1管 |
2 | SS,、SS2混合酶液 | 62.5μL×1管 | 125μL×1管 |
3 | SS、SS2陽性對照 | 40μL×1管 | 40 μL×1管 |
4 | SS,、SS2陰性對照 | 40μL×1管 | 40 μL×1管 |
5 | 說明書 | 1份 | 1份 |
注：陰性對照為不含SS,、SS2的其它菌的混合物，陽性對照為滅活的SS,、SS2,。
【儲存條件及有效期】避光-20℃以下保存，避免反復(fù)凍融,，有效期12個月,。
【適用儀器】ABI 系列,、Bio-Rad系列,、Agilent Stratagene MX系列 、Roche LightCycler R480,、Cepheid SmartCycler,、Rotor-Gene系列、杭州博日系列等多通道實時熒光定量PCR儀,。
【樣本要求】
1. 如使用原始標本進行檢測,標本應(yīng)為新鮮采集并使用雙蒸滅菌水或滅菌生理鹽水懸浮的原始標本,。
2. 如需在增菌后進行PCR檢測，則應(yīng)使用選擇性增菌液對原始標本進行增菌,。
3. 標本收集后若不能立即檢測,，可置于2～8℃冷藏過夜保存；如需長期保存,，標本應(yīng)凍存于-20℃～-80℃,。
【檢驗方法】
1. 試劑準備（試劑準備區(qū)）
（1）從冰箱中取出試劑盒, 從試劑盒中取出實驗所需試劑，充分融化混勻并瞬時離心以去除管壁附著液體。
（2）核算當(dāng)次實驗所需要的反應(yīng)數(shù)（n）,，并根據(jù)如下表所示反應(yīng)體系計算當(dāng)次實驗所需要的各種試劑量,。
n =陰性對照數(shù)（1T）+陽性對照數(shù)（1T）+誤差預(yù)留量（1T）+樣本數(shù)
單反液配制表(每份) | PCR反應(yīng)液 | 17.5 μL |
混合酶液（Taq酶+UNG酶） | 2.5 μL |
(3)在無菌離心管中加入上述試劑，充分混勻后瞬時離心,。按照20 μL/管分裝量將試劑分裝至PCR反應(yīng)管,。
(4) 蓋緊PCR反應(yīng)管蓋后將PCR反應(yīng)管至樣本處理區(qū)。剩余試劑放回-20℃以下冰箱冷凍保存,。
2.樣本準備（樣本處理區(qū)）
用QIAGEN,、Roche公司DNA提取試劑盒提取DNA，具體操作按照其試劑盒說明書操作,。
3.加樣
在上述制備好的PCR反應(yīng)樣本管中分別加入處理好的待測標本DNA各5μl,、終體積25μl/管，蓋好PCR反應(yīng)蓋混勻后瞬時低速離心,，轉(zhuǎn)移到PCR儀器上,。陰性對照和陽性對照管則各加5μL試劑盒自帶的陰性對照或陽性對照品，終體積為25μl/管,，蓋好PCR反應(yīng)蓋混勻后瞬時低速離心,，轉(zhuǎn)移到PCR儀器上。
4.PCR（PCR擴增區(qū)）
（1）取樣本處理區(qū)準備好的PCR反應(yīng)管,，放置在實時熒光定量PCR儀樣品槽相應(yīng)位置,，并記錄放置順序。
（2）按下表設(shè)置儀器核酸擴增相關(guān)參數(shù)進行PCR擴增,。
反應(yīng)體積 | 25 μL | 通道選擇 | FAM通道采集SS熒光信號 HEX通道采集SS2熒光信號 |
PCR 反應(yīng) 條件 | 步驟 | 條件 | 循環(huán)數(shù) |
UNG處理 | 50℃：2分鐘（min） | 1 | |
預(yù)變性 | 95℃：3分鐘（min） | 1 | |
預(yù)擴增 | 95℃：5秒（s） | 5 | |
55℃：40秒（s） | |||
PCR擴增 | 95℃：5秒（s） | 40 | |
55℃：40秒（s） （此階段結(jié)束時采集熒光信號） |
注：ABI系列熒光PCR儀在設(shè)置時不選ROX校正,，設(shè)置淬滅基團選擇None。
【參考值（參考范圍）】
1.試劑盒有效性判定：
（1）陽性對照：有典型S型擴增曲線或Ct值≤35,。
（2）陰性對照：Ct值＞38或無Ct值,，線形為直線或輕微斜線，無指數(shù)增長期,。
2.標本結(jié)果判定：
（1）陽性：標本檢測結(jié)果Ct值≤35或有明顯指數(shù)增長期,。
（2）可疑：標本檢測結(jié)果Ct值在35～38范圍內(nèi)。此時應(yīng)對標本進行重復(fù)檢測,，如重復(fù)實驗結(jié)果Ct值仍在35～38范圍內(nèi),，有明顯指數(shù)增長期，則判定為陽性,，否則為陰性,。
（3）陰性：標本檢測結(jié)果Ct值＞38或無Ct值。
【檢驗結(jié)果的解釋】
通道及檢測結(jié)果 | 標本檢測結(jié)果解釋 | |
FAM | HEX | |
陰性（－） | 陰性（－） | 標本中未檢出SS,、SS2 |
陰性（－） | 陽性（＋） | 標本中檢測出SS2,，未檢出SS |
陽性（＋） | 陰性（－） | 標本中檢測出SS,，未檢出SS2 |
陽性（＋） | 陽性（＋） | 標本中檢測出SS和SS2 |
【檢驗方法的局限性】
1. 當(dāng)檢測樣本中被檢核酸濃度含量低于本試劑盒的檢出*可能會發(fā)生假陰性的結(jié)果。
2. 本試劑盒僅供標本初步篩查使用,，對于本試劑盒檢測陽性結(jié)果應(yīng)進一步使用培養(yǎng)法進行確診,。
【產(chǎn)品性能指標】 產(chǎn)品的檢出限為102CFU，產(chǎn)品CV值≤5%,。
【注意事項】
3. 整個檢測過程應(yīng)嚴格按照本說明書要求分別在試劑準備區(qū),、樣本處理區(qū)和PCR擴增區(qū)進行操作，各區(qū)實驗服,、儀器,、耗材應(yīng)獨立使用，不能混用,；實驗用吸頭采用帶濾芯吸頭,；樣本處理區(qū)應(yīng)配有生物安全柜，樣本處理在生物安全柜中進行操作,；三個區(qū)應(yīng)該配有紫外線殺菌裝置,。
4. 每次實驗應(yīng)該設(shè)置陰、陽性對照,。
5. 為保證試劑不受標本污染,，必須將混合酶液及PCR反應(yīng)液保存于試劑準備區(qū)。
6. 試劑盒所有試劑在使用前應(yīng)該在常溫下充分融化混勻,，并應(yīng)瞬時離心,。
7. 試劑盒內(nèi)所配陰性和陽性對照在di一次使用前應(yīng)全部轉(zhuǎn)移至標本準備區(qū)，并單獨存放,。
8. 為防止熒光干擾,，應(yīng)避免裸手直接接觸PCR反應(yīng)管，并應(yīng)避免在PCR反應(yīng)管上進行任何標記,。
9. 儀器擴增相關(guān)參數(shù)應(yīng)按照本說明書相關(guān)要求進行設(shè)置,；不同批號試劑不能混用。
10. ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設(shè)置中不選ROX校正,，淬滅基因選擇None,。
11. 實驗過程中產(chǎn)品的廢棄物應(yīng)該進行無害化處理后方可丟棄。