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| 純度 | 99% | 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
|---|---|---|---|
| 規(guī)格 | 25T/50T | 應用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè),綜合 |
| 主要用途 | 病毒檢測 |
產(chǎn)品簡介
詳細介紹
禽.流感病毒H9亞型試劑盒（實時熒光PCR法）
【產(chǎn)品名稱】
通用名稱：禽流.感病毒H9亞型試劑盒（實時熒光PCR法）
英文名稱 ：Avian Influenza Virus H9 hemagglutinin subtypes Detection Kit (Real-Time PCR Method)
【包裝規(guī)格】 25頭份/盒 & 50頭份/盒
【預期用途】
禽.流感病毒H9亞型試劑盒（實時熒光PCR法）適用于禽.流感病毒H9亞型檢測,，可用于臨床禽.流感感病毒H9亞型感染的輔助診斷,，但不作確診使用。
【檢驗原理】
禽.流感病毒H9亞型試劑盒（實時熒光PCR法）針對禽.流感病毒H9亞型基因組高度保守區(qū)域設(shè)計特異性引物和探針,，在反應體系中含禽.流感病毒H9亞型基因組模板的情況下,，PCR反應得以進行并釋放熒光信號。利用熒光定量PCR儀對PCR過程中相應通道信號進行實時監(jiān)測和輸出,，實現(xiàn)檢測結(jié)果的定性分析,。
【主要組成成份】
序號 | 組成 | 25頭份/盒 | 50頭份/盒 |
1 | 禽.流感H9 RT-PCR反應液 | 375 μL×1管 | 750 μL×1管 |
2 | 禽.流感H9逆轉(zhuǎn)錄酶 | 50 μL×1管 | 100 μL×1管 |
3 | 禽.流感H9 Taq酶 | 75 μL×1管 | 150 μL×1管 |
4 | 禽.流感H9陽性對照 | 40 μL×1管 | 40 μL×1管 |
5 | 禽.流感H9陰性對照 | 40 μL×1管 | 40 μL×1管 |
6 | 說明書 | 1份 | 1份 |
注：陰性對照為禽類基因組DNA，陽性對照為失去活性的禽.流感病毒H9亞型cDNA,。
【儲存條件及有效期】避光-20℃以下保存,，避免反復凍融，有效期12個月,。
【適用儀器】ABI 系列,、Bio-Rad系列、Agilent Stratagene MX系列 ,、Roche LightCycler R480,、Cepheid SmartCycler、Rotor-Gene系列,、杭州博日系列等多通道實時熒光定量PCR儀,。
【樣本要求】
1.取咽喉拭子、泄殖腔拭子或血液樣本，禽肉取肌肉或內(nèi)臟樣本,，樣本處理方法參照相關(guān)文獻資料,。
2.樣本采集后應立即檢測，若不能立即檢測,，應置于-80℃冷凍保存,，避免反復凍融，用干冰或液氮運輸,。
【檢驗方法】
1. 試劑準備（試劑準備區(qū)）
（1）從冰箱中取出試劑盒, 從試劑盒中取出實驗所需試劑,充分融化混勻并瞬時離心以去除管壁附著液體,。
（2）核算當次實驗所需要的反應數(shù)（n），并根據(jù)如下表所示反應體系計算當次實驗所需要的各種試劑量,。
n =陰性對照數(shù)（1T）+陽性對照數(shù)（1T）+誤差預留量（1T）+樣本數(shù)
單反液配制表(每頭份) | RT-PCR反應液 | 15.0 μL |
逆轉(zhuǎn)錄酶 | 2.0 μL | |
Taq酶 | 3.0 μL |
（3）在無菌離心管中加入上述試劑,，充分混勻后瞬時離心。按照20 μL/管分裝量將試劑分裝至PCR反應管,。
2.樣本準備（樣本處理區(qū)）
用QIAGEN,、Roche公司RNA提取試劑盒提取RNA，具體操作按照其試劑盒說明書操作,。
3.加樣
在上述制備好的PCR反應樣本管中分別加入處理好的待測標本RNA各5 μl,、終體積25 μl/管，蓋好PCR反應蓋混勻后瞬時低速離心,，轉(zhuǎn)移到PCR儀器上,。陰性對照和陽性對照管則各加5 μL試劑盒自帶的陰性對照或陽性對照品，終體積為25 μl/管,，蓋好PCR反應蓋混勻后瞬時低速離心,，轉(zhuǎn)移到PCR儀器上,。
4.PCR（PCR擴增區(qū)）
（1）取樣本處理區(qū)準備好的PCR反應管,，放置在實時熒光定量PCR儀樣品槽相應位置，并記錄放置順序,。
（2）按下表設(shè)置儀器核酸擴增相關(guān)參數(shù)進行PCR擴增,。
反應體積 | 25 μL | 通道選擇 | F.AM通道采集禽.流感病毒H9亞型熒光信號 |
PCR 反應 條件 | 步驟 | 條件 | 循環(huán)數(shù) |
反轉(zhuǎn)錄 | 42℃：10分鐘（min） | 1 | |
預變性 | 95℃：3分鐘（min） | 1 | |
預擴增 | 95℃：5秒（s） | 5 | |
55℃：40秒（s） | |||
PCR擴增 | 95℃：5秒（s） | 40 | |
55℃：40秒（s） （此階段結(jié)束時采集熒光信號） |
注：ABI系列熒光PCR儀在設(shè)置時不選ROX校正,，設(shè)置淬滅基團選擇None,。【參考值（參考范圍）】
1.試劑盒有效性判定：
（1）陽性對照：有典型S型擴增曲線或Ct值≤35,。
（2）陰性對照：Ct值＞38或無Ct值,，線形為直線或輕微斜線,，無指數(shù)增長期,。
2.標本結(jié)果判定：
（1）陽性：標本檢測結(jié)果Ct值≤35或有明顯指數(shù)增長期,。
（2）可疑：標本檢測結(jié)果Ct值在35～38范圍內(nèi),。此時應對標本進行重復檢測,，如重復實驗結(jié)果Ct值仍在35～38范圍內(nèi),，有明顯指數(shù)增長期，則判定為陽性，否則為陰性,。
（3）陰性：標本檢測結(jié)果Ct值＞38或無Ct值,。
【檢驗結(jié)果的解釋】
通道及檢測結(jié)果 | 標本檢測結(jié)果解釋 |
FAM | |
+ | 標本中檢出禽.流感病毒H9亞型RNA |
- | 標本中未檢出禽.流感病毒H9亞型RNA |
【檢驗方法的局限性】
1. 當檢測樣本中被檢核酸濃度低于本試劑盒的*檢出*可能會發(fā)生假陰性的結(jié)果。
2. 被檢樣本在采集,、運輸,、儲存以及處理過程中操作方式不當容易造成RNA降解而產(chǎn)生假陰性結(jié)果。
3. 樣本在采集,、運輸,、儲存以及處理過程中發(fā)生交叉污染，則容易得到假陽性結(jié)果,。
【產(chǎn)品性能指標】 產(chǎn)品的*檢出限為102 Copies/mL,，產(chǎn)品CV值≤5%。
【注意事項】
1. 整個檢測過程應嚴格按照本說明書要求分別在試劑準備區(qū),、樣本處理區(qū)和PCR擴增區(qū)進行操作,，各區(qū)實驗服、儀器,、耗材應獨立使用,，不能混用；實驗用吸頭采用帶濾芯吸頭,；樣本處理區(qū)應配有生物安全柜,，樣本處理在生物安全柜中進行操作；三個區(qū)應該配有紫外線殺菌裝置,。
2. 為避免RNA降解,，樣本處理過程應在0-4℃條件下操作，且完成實驗后立即上機檢測,；樣本處理過程中使用的器具耗材應經(jīng)過無核酶處理,。
3. 每次實驗應該設(shè)置陰、陽性對照,。
4. 試劑盒所有試劑在使用前應該在常溫下充分融化混勻,，并應瞬時離心。
5. 試劑盒內(nèi)所配陰性和陽性對照在第1次使用前應全部轉(zhuǎn)移至標本準備區(qū),，并單獨存放,。
6. 為防止熒光干擾，應避免裸手直接接觸PCR反應管,，并應避免在PCR反應管上進行任何標記,。
7. 儀器擴增相關(guān)參數(shù)應按照本說明書相關(guān)要求進行設(shè)置；不同批號試劑不能混用,。
8. ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設(shè)置中不選ROX校正,，淬滅基因選擇None,。
9. 實驗過程中產(chǎn)品的廢棄物應該進行無害化處理后方可丟棄。
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