禽流.感病毒H7亞型檢測(cè)試劑盒

【包裝規(guī)格】 25頭份/盒 & 50頭份/盒

【預(yù)期用途】

禽流.感病毒H7亞型檢測(cè)試劑盒

本試劑盒利用實(shí)時(shí)熒光PCR原理,，定性檢測(cè)禽.流感病毒H7亞型，對(duì)禽.流感病毒引起的流感及其并發(fā)癥的診斷及療效評(píng)估有重要指導(dǎo)意義,。

【檢驗(yàn)原理】

本試劑盒針對(duì)禽流.感病毒H7亞型基因組高度保守區(qū)域設(shè)計(jì)特異性引物和探針,，在反應(yīng)體系中含禽.流感病毒H7亞型基因組模板的情況下，PCR反應(yīng)得以進(jìn)行并釋放熒光信號(hào),。利用熒光定量PCR儀對(duì)PCR過(guò)程中相應(yīng)通道信號(hào)進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)和輸出,，實(shí)現(xiàn)檢測(cè)結(jié)果的定性分析禽.流感病毒H7亞型檢測(cè)試劑盒。

注：陰性對(duì)照為禽類(lèi)基因組DNA,，陽(yáng)性對(duì)照為失去活性的禽.流感病毒H7亞型cDNA,。

【儲(chǔ)存條件及有效期】避光-20℃以下保存,，避免反復(fù)凍融,，有效期12個(gè)月,。

【適用儀器】ABI 系列、Bio-Rad系列,、Agilent Stratagene MX系列 ,、Roche LightCycler R480、Cepheid SmartCycler,、Rotor-Gene系列,、杭州博日系列等多通道實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀。

【樣本要求】

1.取咽喉拭子,、泄殖腔拭子或血液樣本,，禽肉取肌肉或內(nèi)臟樣本，樣本處理方法參照相關(guān)文獻(xiàn)資料,。

2.樣本采集后應(yīng)立即檢測(cè),，若不能立即檢測(cè)，應(yīng)置于-80℃冷凍保存,，避免反復(fù)凍融,，用干冰或液氮運(yùn)輸。

【檢驗(yàn)方法】

1. 試劑準(zhǔn)備（試劑準(zhǔn)備區(qū)）

（1）從冰箱中取出試劑盒, 從試劑盒中取出實(shí)驗(yàn)所需試劑,充分融化混勻并瞬時(shí)離心以去除管壁附著液體,。

（2）核算當(dāng)次實(shí)驗(yàn)所需要的反應(yīng)數(shù)（n）,，并根據(jù)如下表所示反應(yīng)體系計(jì)算當(dāng)次實(shí)驗(yàn)所需要的各種試劑量。

n =陰性對(duì)照數(shù)（1T）+陽(yáng)性對(duì)照數(shù)（1T）+誤差預(yù)留量（1T）+樣本數(shù)

(3)在無(wú)菌離心管中加入上述試劑,，充分混勻后瞬時(shí)離心,。按照20 μL/管分裝量將試劑分裝至PCR反應(yīng)管。

2.樣本準(zhǔn)備（樣本處理區(qū)）

用QIAGEN,、Roche公司RNA提取試劑盒提取RNA,，具體操作按照其試劑盒說(shuō)明書(shū)操作。

3.加樣

在上述制備好的PCR反應(yīng)樣本管中分別加入處理好的待測(cè)標(biāo)本RNA各5 μl,、終體積25 μl/管,，蓋好PCR反應(yīng)蓋混勻后瞬時(shí)低速離心，轉(zhuǎn)移到PCR儀器上,。陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照管則各加5 μL試劑盒自帶的陰性對(duì)照或陽(yáng)性對(duì)照品,，終體積為25 μl/管，蓋好PCR反應(yīng)蓋混勻后瞬時(shí)低速離心,，轉(zhuǎn)移到PCR儀器上,。

4.PCR（PCR擴(kuò)增區(qū)）

（1）取樣本處理區(qū)準(zhǔn)備好的PCR反應(yīng)管，放置在實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀樣品槽相應(yīng)位置,，并記錄放置順序,。

（2）按下表設(shè)置儀器核酸擴(kuò)增相關(guān)參數(shù)進(jìn)行PCR擴(kuò)增。

注：ABI系列熒光PCR儀在設(shè)置時(shí)不選ROX校正,，設(shè)置淬滅基團(tuán)選擇None,。

【參考值（參考范圍）】

1.試劑盒有效性判定：

（1）陽(yáng)性對(duì)照：有典型S型擴(kuò)增曲線(xiàn)或Ct值≤35,。

（2）陰性對(duì)照：Ct值＞38或無(wú)Ct值，線(xiàn)形為直線(xiàn)或輕微斜線(xiàn),，無(wú)指數(shù)增長(zhǎng)期,。

2.標(biāo)本結(jié)果判定：

（1）陽(yáng)性：標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果Ct值≤35或有明顯指數(shù)增長(zhǎng)期。

（2）可疑：標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果Ct值在35～38范圍內(nèi),。此時(shí)應(yīng)對(duì)標(biāo)本進(jìn)行重復(fù)檢測(cè),，如重復(fù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果Ct值仍在35～38范圍內(nèi)，有明顯指數(shù)增長(zhǎng)期,，則判定為陽(yáng)性,，否則為陰性。

（3）陰性：標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果Ct值＞38或無(wú)Ct值,。

【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】

【檢驗(yàn)方法的局限性】

1. 當(dāng)檢測(cè)樣本中被檢核酸濃度低于本試劑盒的*檢出*可能會(huì)發(fā)生假陰性的結(jié)果,。

2. 被檢樣本在采集、運(yùn)輸,、儲(chǔ)存以及處理過(guò)程中操作方式不當(dāng)容易造成RNA降解而產(chǎn)生假陰性結(jié)果,。

3. 樣本在采集、運(yùn)輸,、儲(chǔ)存以及處理過(guò)程中發(fā)生交叉污染,，則容易得到假陽(yáng)性結(jié)果。

【產(chǎn)品性能指標(biāo)】 產(chǎn)品的*檢出限為10² Copies/mL,，產(chǎn)品CV值≤5%,。