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熒光PCR凍干保護(hù)劑之甘油

閱讀:5237      發(fā)布時(shí)間:2020-8-3
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多元醇類凍干保護(hù)劑包括甘油,、甘露醇、山梨糖醇,、肌醇,、木糖醇、叔丁醇,、側(cè)金盞花醇等,,這一類凍干保護(hù)劑是比較常用較為普遍的凍干保護(hù)劑,。以甘油作為凍干保護(hù)劑來介紹一下在蛋白質(zhì)凍干中的作用。甘油具有良好的滲透能力,,可以進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部和胞內(nèi)大分子形成氫鍵以取代干燥脫除的水分,,從而維持蛋白質(zhì)、碳水化合物及脂肪等大分子活性物質(zhì)的原有結(jié)構(gòu),。此外,,甘油還可以起到降低細(xì)胞脫水皺縮和緩解復(fù)水腫脹的效果。另外醇和糖類相似均具有醇和糖類羥基官能團(tuán),,均能產(chǎn)生“優(yōu)先水化作用”以及改變體系的玻璃態(tài)轉(zhuǎn)變溫度等,,故在發(fā)揮保護(hù)效果方面和糖類具有一定共性。須知蛋白在使用時(shí)候存在凍融情況下建議可以選甘露醇,、右旋糖酐40,、蔗糖,另外40%-50%的甘油效果也很好,。

PCR試劑凍干示例:

(1)將熒光PCR擴(kuò)增緩沖液,、引物、探針,、熱啟動(dòng)Taq酶,、UNG酶、dATP,、dGTP,、dCTP、dTTP,、dUTP,、凍干保護(hù)劑按照配方進(jìn)行混合;

(2)凍干保護(hù)劑可選用:甘油,、海藻糖,、蔗糖、甘露醇,、PEG,、PVP、DTT,、牛血清白蛋白,、吐溫100、甲酰胺,、氨基酸等,。

(3)將上述混合液灌裝至PCR擴(kuò)增管或者八聯(lián)管中。

(4)進(jìn)行凍干。(5)出倉進(jìn)行測試,。(6)配方修正,。

 

 

 

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