熒光PCR的探針法分為全基因組核酸探針、克隆探針,、寡核苷酸探針,、單鏈RNA探針、cDNA探針,、蛋白質(zhì)探針以及酶探針。帶大家一起了解下寡核苷酸探針,、cDNA探針,、RNA探針的特點。寡核苷酸探針特異性較高,,區(qū)別染色體上一個堿基的突變,;由于其鏈短,分子量小,,雜交時間較短(僅需1-2小時),,可預(yù)測雜交條件,可直接利用DNA序列人工合成獲得特異片段而無需分子克隆,,獲得探針相對容易,。但是由于其鏈短致使標(biāo)記率較低,也影響了檢測的敏感性,,僅能檢出含很少的標(biāo)本,。cDNA探針以RNA為模板,用反轉(zhuǎn)錄酶合成單鏈cDNA探針,。主要用來分離cDNA文庫中相應(yīng)的基因,。RNA探針一般是單鏈,具有單鏈DNA探針的優(yōu)點,,又具有RNA:DNA雜交體比DNA:DNA雜交體有更高的穩(wěn)定性,,所以在雜交反應(yīng)中RNA探針比相同活性的DNA探針?biāo)a(chǎn)生信號要強。熒光定量PCR類產(chǎn)品的組成方式通常為:1管反應(yīng)緩沖液+1管酶的形式,。其中反應(yīng)緩沖液包含熒光PCR反應(yīng)緩沖系統(tǒng),、引物、探針,、dNTP,;酶包含Taq酶,、UNG酶。這種形式的產(chǎn)品使用方法復(fù)雜,,必須先將反應(yīng)緩沖液和酶按照比例混合均勻后,,分裝至PCR擴增管中,然后再加入樣本,。由于酶的用量通常較少(≤0.5μL),、酶液較粘稠,且配制過程繁瑣,,配制誤差較大,、反應(yīng)重復(fù)性不好。熒光PCR凍干的試劑凍干機Pilot5-8T技術(shù)要點:
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