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中斯立孚(天津)生物技術(shù)...

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熒光定量PCR實驗時的好方法

閱讀:1882      發(fā)布時間:2020-7-18
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實時熒光定量PCR技術(shù)實現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍,具有特異性更強,、有效解決PCR污染問題,、自動化程度高等特點,成為核酸分子定量的標準方法,。在做熒光定量PCR實驗時建議使用這些耗材:96孔光學反應板配合光學膜,,0.2ml光學八聯(lián)反應管配合光學膜,0.2ml光學八聯(lián)反應管配合平蓋的光學八聯(lián)管蓋等,。在做熒光定量PCR實驗時有一些好的方法分享給大家,,例如在使用單管或者8連管做實驗時,如果在樣本數(shù)量不多的時候,,建議在樣品加熱塊(TRAY)上對稱的安放樣品,,并且先放在第6列或者第7列,然后逐漸向兩邊放置,。這樣熱蓋壓下來的時候不至于發(fā)生傾斜,,每個反應管的受力和受熱都比較均勻,提高了孔與孔之間的數(shù)據(jù)精密性,。又例如使用96孔板做實驗的時候,,建議使用光學膜代替蓋子來密封反應孔。封膜的方法要先沿著96孔板的縱向壓膜,,然后在橫向,,后在沿著板的邊緣按壓密封。Pilot5-8T凍干機應用示例(熒光PCR凍干):

  1. 探針,、底物,、引物原料要求確定。
  2. 凍干溶液配方開發(fā),,采用正交法或響應曲面法進行輔料篩選,。
  3. 選擇適合的包材和模具。
  4. 設計凍干曲線配合輔料篩選,。
  5. 確定配方及工藝,。
  6. 穩(wěn)定性測試。
  7. 根據(jù)穩(wěn)定性測試結(jié)果修正工藝或配方,。
  8. 整個環(huán)節(jié)注意環(huán)境,、設備、人員的結(jié)合,。

 

型號

Pilot3-6T

Pilot5-8T

Pilot7-12T

Pilot10-15T

凍干面積

0.42

0.56

0.84

1.05

22西林瓶裝量(20ML

≥900

≥1170

≥1500

≥2100

16西林瓶裝量(5ML

≥1700

≥2210

≥3100

≥4100

冷阱溫度(空載)

-85

真空度(空載)

≤1Pa

板層溫度(空載)

-55

板層制冷方式

硅油循環(huán)

板層數(shù)量

3+1

4+1

4+1

5+1

板層尺寸(mm

350*400

350*400

350*600

350*600

捕水能力

6L

8L

12L

10L

凍干效率

3L/24H

5L/24H

7L/24H

10L/24H

板層間距

100mm

80mm

90mm

100mm

穿墻隔離

凍干曲線擬合度

100%

100%

100%

100%

晶型控制

蒸汽分壓控制

升華結(jié)束判定

凍干終點測試

壓塞

液壓

整機尺寸 (約)

W860*D1400*H1800

W860*D1400*H1800

W860*D1700*H1900

W860*D1700*H1900

 

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