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核酸檢測PCR實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)方案
新guan病毒檢測中，核酸檢測是目前可靠的篩查和確認(rèn)手段,，使用也為普遍,。而核酸檢測方法中，PCR儀無疑是本次疫情檢測的關(guān)鍵利器,。但核酸檢測過程很容易受污染,，整個(gè)操作需要在嚴(yán)格的實(shí)驗(yàn)環(huán)境中，才能保證數(shù)據(jù)結(jié)果的準(zhǔn)確性,，不漏檢,、錯(cuò)檢疑似病例。
核酸檢測中,，應(yīng)該如何{建設(shè)一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的PCR實(shí)驗(yàn)室如何設(shè)計(jì)規(guī)劃才堪稱專業(yè),？PCR實(shí)驗(yàn)室管理又有哪些注意要點(diǎn)？
標(biāo)準(zhǔn)的PCR實(shí)驗(yàn)室分為四個(gè)區(qū)域,，分別為：1.試劑配制區(qū),；2.樣品處理區(qū)；3.核酸擴(kuò)增區(qū),；4.產(chǎn)物分析區(qū)
一,、PCR實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)規(guī)劃
如使用全自動(dòng)分析儀，區(qū)域可適當(dāng)合并,。（進(jìn)入各工作區(qū)域必須嚴(yán)格按照單一方向進(jìn)行,，不同的工作區(qū)域使用不同的工作服，例如不同的顏色,。工作人員離開各工作區(qū)域時(shí),，不得將工作服帶出）
二、PCR實(shí)驗(yàn)室平面布局
【各區(qū)的功能分別為】
試劑準(zhǔn)備區(qū)：擴(kuò)增試劑的配制,、分裝和保存,。
樣品處理區(qū)：樣品登記、分裝,；核酸提取,、保存和加樣。
擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)：擴(kuò)增產(chǎn)物的測定,、結(jié)果分析,、登記及報(bào)告擴(kuò)增前區(qū)與擴(kuò)增后區(qū)應(yīng)嚴(yán)格分開，須使用不同的房間,，兩區(qū)之間好有一定的間隔,。
使用商品化試劑盒可在樣品處理區(qū)進(jìn)行少量試劑配制。
在滿足下列操作和清潔處理要求的前提下樣品處理區(qū)和試劑準(zhǔn)備區(qū)可設(shè)在同一房間內(nèi)：
在生物安全柜內(nèi)操作,；
每個(gè)實(shí)驗(yàn)人員,、實(shí)驗(yàn)組分別使用各自的試劑及耗材,；盛放污染材料的器皿密封并一次性使用；
用有效的方法對操作區(qū)域和共享器具在實(shí)驗(yàn)前后進(jìn)行清潔及消毒,。
三,、PCR實(shí)驗(yàn)室建設(shè)規(guī)劃要點(diǎn)
1、主體結(jié)構(gòu)：主體為彩鋼板,、鋁合金型材,。室內(nèi)所有陰角、陽角均采用鋁合金50內(nèi)圓角鋁,，從而解決容易污染,、積塵、不易清掃等問題,。結(jié)構(gòu)牢固,，線條簡明，美觀大方,，密封性好,。
2、標(biāo)準(zhǔn)的三區(qū)分隔和氣壓調(diào)節(jié)：將PCR過程分成試劑準(zhǔn)備,、標(biāo)本制備和PCR擴(kuò)增檢測三個(gè)獨(dú)立的實(shí)驗(yàn)區(qū),。整個(gè)區(qū)域有一個(gè)整體緩沖走廊。每個(gè)獨(dú)立實(shí)驗(yàn)區(qū)設(shè)置有緩沖區(qū),，同時(shí)各區(qū)通過氣壓調(diào)節(jié),，使整個(gè)PCR實(shí)驗(yàn)過程中試劑和標(biāo)本免受氣溶膠的污染并降低擴(kuò)增產(chǎn)物對人員和環(huán)境的污染。
可打開緩沖區(qū)Ⅰ,，緩沖區(qū)Ⅱ和PCR擴(kuò)增區(qū)的排風(fēng)扇往外排氣,，在實(shí)驗(yàn)區(qū)的外墻上和各扇門上都安裝有風(fēng)量可調(diào)的回風(fēng)口，空氣通過回風(fēng)口向室內(nèi)換氣,。
3,、消毒：在三個(gè)實(shí)驗(yàn)區(qū)和三個(gè)緩沖區(qū)頂部以及傳送窗內(nèi)部安裝有紫外燈，供消毒用,。在試劑準(zhǔn)備區(qū)和標(biāo)本制備區(qū)還設(shè)置移動(dòng)紫外線燈,，對實(shí)驗(yàn)桌進(jìn)行局部消毒。
4,、機(jī)械連鎖不銹鋼傳遞窗：試劑和標(biāo)本通過機(jī)械連鎖不銹鋼（不建議使用電子連鎖方式）傳遞窗傳遞,，保證試劑和標(biāo)本在傳遞過程中不受污染（人物分流）
5、地面地面建議使用PVC卷材地面或自流坪地面,，整體性好。便于進(jìn)行清掃,，耐腐蝕,。沒有條件的也可采用水磨石地面，或大塊的瓷磚（至少800mm×800mm）接縫需要小于2mm。
6,、照明燈具要選用凈化燈具,，能達(dá)到便于清洗、不積塵的特點(diǎn),。在建設(shè)的過程中應(yīng)注意●規(guī)范的安裝流程和全面的服務(wù)流程,。●嚴(yán)格按照規(guī)范科學(xué)設(shè)計(jì)的安裝流程,?！癜惭b前需要確定以下安裝條件，如：電源電壓,，電源進(jìn)線位置,，電話網(wǎng)絡(luò)線進(jìn)線位置，進(jìn)水水壓,，小安裝空間,，地面平整度，通風(fēng)孔,、進(jìn)水管和下水管的位置等,，理想狀態(tài)的空間尺寸和通風(fēng)口尺寸。
四,、PCR實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)要點(diǎn)
PCR實(shí)驗(yàn)室可以是分散形式,，也可以是組合形式。完成一組PCR實(shí)驗(yàn),，通常應(yīng)經(jīng)過試劑配制,、樣品處理、核酸擴(kuò)增及產(chǎn)物分析四個(gè)實(shí)驗(yàn)過程,，若實(shí)驗(yàn)工藝需要,，還應(yīng)增加樣品粉碎過程。
一,、分散形式PCR實(shí)驗(yàn)室所謂分散形式PCR實(shí)驗(yàn)室,，是指完成上述實(shí)驗(yàn)過程的實(shí)驗(yàn)用房彼此相距較遠(yuǎn)，呈分散布置形式,。對于這種布置形式的PCR實(shí)驗(yàn)室,，由于各個(gè)實(shí)驗(yàn)之間不易相互干擾，因此無需特殊條件要求,。
二,、組合形式PCR實(shí)驗(yàn)室所謂組合形式PCR實(shí)驗(yàn)室,是指完成PCR四個(gè)實(shí)驗(yàn)過程的實(shí)驗(yàn)用房相鄰布置，組成獨(dú)立實(shí)驗(yàn)區(qū)域的形式,。對于組合形式PCR實(shí)驗(yàn)室,，由于各個(gè)實(shí)驗(yàn)間集中布置,，容易造成相互干擾，因此,，對總體布局以及屏障系統(tǒng)具有一定的要求,。各室在入口處設(shè)緩沖間，以減少室內(nèi)外空氣交換,。
PCR實(shí)驗(yàn)室建設(shè)一些經(jīng)驗(yàn)分享：
試劑配制室及樣品處理室宜呈微正壓,，以防外界含核酸氣溶膠的空氣進(jìn)入，造成污染,；
可以通過控制進(jìn)風(fēng)風(fēng)量大于排風(fēng)風(fēng)量達(dá)到正壓效果,。
核酸擴(kuò)增室及產(chǎn)物分析室應(yīng)呈微負(fù)壓，以防含核酸的氣溶膠擴(kuò)散出去污染試劑與樣品,，可以通過控制排風(fēng)風(fēng)量大于進(jìn)風(fēng)風(fēng)量達(dá)到負(fù)壓效果,。
在理想情況下，PCR實(shí)驗(yàn)室緩沖間內(nèi),，可設(shè)置正壓,，使室內(nèi)空氣不流向室外，室外空氣不流向室內(nèi),。PCR實(shí)驗(yàn)室進(jìn)風(fēng)由原有中央空調(diào)控制,，要求將中央空調(diào)風(fēng)口安裝到定點(diǎn)，且高度為地面鋪裝好后2600mm處,。
如果使用熒光PCR儀,，擴(kuò)增室和產(chǎn)物分析室可以合并。
若房間進(jìn)深允許,，可設(shè)PCR內(nèi)部走廊,。需要指出的是在減少室內(nèi)外空氣交換方面，緩沖間比走廊更有意義,。
各個(gè)區(qū)域之間應(yīng)具備單向的實(shí)驗(yàn)工藝流,、物流、人流與氣流,，形成單向流程的保護(hù)屏障,，避免實(shí)驗(yàn)之間的相互干擾，防止核酸氣溶膠對實(shí)驗(yàn)過程造成污染產(chǎn)生假性結(jié)果,。
實(shí)驗(yàn)室的墻體,，包括頂棚，應(yīng)結(jié)構(gòu)牢固,、氣密性好,；所有陰角宜采用圓弧形線條過渡；墻體內(nèi)壁光潔,、不吸附,、耐腐蝕,、易清洗消毒；地面材料應(yīng)滿足無縫隙,、無滲漏、光潔,、耐腐蝕的要求,。
PCR實(shí)驗(yàn)室主要設(shè)備
試劑準(zhǔn)備區(qū)
儀器設(shè)備主要有冰箱、超凈臺,、加樣器,、混勻器、天平和離心機(jī)等,，加樣器,、天平除了要外，還應(yīng)有定期校準(zhǔn),。試劑分裝應(yīng)在超凈臺中進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)混合液應(yīng)使用分子生物學(xué)比較的,，試劑制備好后應(yīng)有質(zhì)檢：一是否有污染、二是檢測試劑的擴(kuò)增效果,。
標(biāo)本制備區(qū)
儀器設(shè)備主要有生物安全柜,、加樣器、離心機(jī),、溫育儀,、混勻器等
擴(kuò)增區(qū)
擴(kuò)增區(qū)的主要儀器是核酸擴(kuò)增儀、超凈臺,、微量加樣器,、離心機(jī)、可移動(dòng)紫外燈,。擴(kuò)增儀需進(jìn)行校準(zhǔn),。并配備UPS電源，以防止由于電壓的波動(dòng),，停電對擴(kuò)增效果的影響,。
分析區(qū)
本區(qū)所使用的儀器設(shè)備有酶標(biāo)儀、洗板機(jī),、加樣器和水浴箱等潔凈實(shí)驗(yàn)區(qū)的緩沖間部分面積不能超過主實(shí)驗(yàn)室的八分之一,這是有規(guī)定的,。
一些瑣碎的、不可忽略的實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)
1.實(shí)驗(yàn)室空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)設(shè)計(jì)及壓力控制
PCR實(shí)驗(yàn)室并沒有嚴(yán)格的凈化要求,，但是為避免各個(gè)實(shí)驗(yàn)區(qū)域間交叉污染的可能性,，宜采用全送全排的氣流組織形式。同時(shí),，要嚴(yán)格控制送,、排風(fēng)的比例以保證各實(shí)驗(yàn)區(qū)的壓力要求,。
2.污染的預(yù)防與控制
PCR實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)的核心問題是如何避免污染。在實(shí)際工作中,，常見的有以下幾種污染類型：擴(kuò)增產(chǎn)物的污染,；天然基因組DNA的污染；試劑的污染以及標(biāo)本間的污染,。由于一旦發(fā)生污染,，實(shí)驗(yàn)就必須停止，直到找到污染源為止,，而且實(shí)驗(yàn)結(jié)果必須作廢,，需重新進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。所以發(fā)生污染后再圍繞實(shí)驗(yàn)室來尋找污染源不但耗時(shí)而且繁瑣,，浪費(fèi)人力物力,。因此要避免污染，首先應(yīng)是預(yù)防,，而不是排除,。
PCR實(shí)驗(yàn)室*的嚴(yán)格管理
（1）嚴(yán)格控制進(jìn)出實(shí)驗(yàn)室的人員。與實(shí)驗(yàn)無關(guān)的人員不得隨意進(jìn)出實(shí)驗(yàn)室,，有條件的情況下要設(shè)置獨(dú)立的通道和進(jìn)出整個(gè)實(shí)驗(yàn)區(qū)的門,；
（2）盡量減少在實(shí)驗(yàn)區(qū)內(nèi)不必要的走動(dòng)以減少交叉污染的可能性。
（3）擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)是主要的擴(kuò)增產(chǎn)物污染來源,，廢液不能在實(shí)驗(yàn)室中傾倒,，必須經(jīng)消毒液浸泡消毒后在遠(yuǎn)離實(shí)驗(yàn)室的地方棄掉，用過的吸頭等一次性材料也應(yīng)經(jīng)消毒液浸泡消毒后統(tǒng)一處理,，如焚燒等,；
（4）擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)可能會用到某些可致基因突變和有毒物質(zhì)，應(yīng)特別注意實(shí)驗(yàn)人員的安全防護(hù),。完備的實(shí)驗(yàn)室配套設(shè)施是保證實(shí)驗(yàn)工作的必要條件,，應(yīng)根據(jù)各個(gè)實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)內(nèi)容的不同配備相應(yīng)的設(shè)備和儀器，如超凈工作臺,、離心機(jī),、加樣器等。