細(xì)胞解凍和培養(yǎng)指南

凍存的ATCC細(xì)胞株和雜交瘤細(xì)胞株在運(yùn)送過程中使用干冰保持低溫,。收到凍存細(xì)胞后,，可以立即解凍復(fù)蘇,，去除二甲基亞砜（DMSO）后進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng),。如果不立即復(fù)蘇培養(yǎng)細(xì)胞,，必須將細(xì)胞凍存管放置于液氮罐氣相層存儲(chǔ),。請不要將細(xì)胞存儲(chǔ)在-130℃以上的溫度,。如果溫度不夠低，達(dá)不到-130℃,，細(xì)胞活力會(huì)迅速下降,。

操作推薦

ATCC推薦在操作凍存的ATCC細(xì)胞株時(shí)使用手套，工作服和防護(hù)面具以避免任何事故發(fā)生,。

檢查包裝,，查看是否有任何破裂或滲漏。凍存的ATCC細(xì)胞株應(yīng)處于固體狀,。

將凍存的ATCC細(xì)胞株從有干冰的包裝中取出,，立即復(fù)蘇培養(yǎng)，或迅速轉(zhuǎn)移放置在液氮罐氣相層在-130℃以下的溫度存儲(chǔ),。

凍存細(xì)胞的復(fù)蘇和培養(yǎng)

1,、先準(zhǔn)備好細(xì)胞培養(yǎng)皿或細(xì)胞培養(yǎng)瓶，及產(chǎn)品說明推薦的相應(yīng)細(xì)胞培養(yǎng)基,。并在37℃水浴中預(yù)先溫?zé)峒?xì)胞培養(yǎng)基,。（請參閱：注1）

2、小心取出裝有細(xì)胞的凍存管,，保持管蓋擰緊,，將凍存管蓋以下的部分置于37℃水浴中并輕微的攪拌以幫助解凍,。解凍過程應(yīng)該盡快，大約短于2分鐘或待后一塊小冰晶體剛?cè)诨?，就?yīng)將細(xì)胞凍存管取出水浴,。

3、在水浴中取出的細(xì)胞凍存管表面噴灑70%乙醇配制的消毒劑,，用無菌紙巾或紗布拭干,。之后的操作步驟都應(yīng)該遵循在無菌條件下生物安全柜中嚴(yán)格操作。

4,、小心擰開凍存管的頂部,，將管內(nèi)容物用1ml移液槍轉(zhuǎn)移到含9毫升培養(yǎng)基的無菌離心管中。離心5到7分鐘（125xg）,，小心吸去上清液以去除抗凍劑（二甲基亞砜）,，避免丟失細(xì)胞沉淀。將細(xì)胞沉淀重懸于配好的*培養(yǎng)基中,。將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)容器,，輕輕搖晃使細(xì)胞均勻的分布。生長較慢的細(xì)胞株可重懸于5-8ml培養(yǎng)基并轉(zhuǎn)移到T25培養(yǎng)瓶,。生長較快的細(xì)胞株可重懸于12-20ml培養(yǎng)基并轉(zhuǎn)移到T75培養(yǎng)瓶,。

5、將細(xì)胞培養(yǎng)容器置于細(xì)胞培養(yǎng)箱,，在溫度37℃,，二氧化碳濃度5%的培養(yǎng)條件下進(jìn)行孵育。細(xì)胞培養(yǎng)24小時(shí)后應(yīng)在顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)和生長狀況,。（請參閱：注2）

*注1：雖然大多數(shù)細(xì)胞株可以在一種以上的培養(yǎng)基中生長,，但細(xì)胞的特征有可能會(huì)在更換不同培養(yǎng)基時(shí)發(fā)生。為保證好的效果,，請從細(xì)胞培養(yǎng)一開始就使用ATCC推薦的培養(yǎng)基,。

*注2：某些細(xì)胞株，如雜交瘤株,，可能需要幾天的時(shí)間才從凍存狀態(tài)下*恢復(fù)正常生長,。在細(xì)胞復(fù)蘇培養(yǎng)天可能會(huì)呈現(xiàn)較低的細(xì)胞活力并產(chǎn)生一些細(xì)胞碎片。度過這一時(shí)期后,，細(xì)胞會(huì)恢復(fù)并進(jìn)入指數(shù)增長期,。

武漢中昌國研標(biāo)物科技有限公司提示您：

細(xì)胞株的生長有兩種狀態(tài)，貼壁細(xì)胞需要附著在一個(gè)表面進(jìn)行生長（貼壁依賴性）,，懸浮細(xì)胞可在懸浮培養(yǎng)狀態(tài)下生長（非貼壁依賴）,。在細(xì)胞單層貼壁生長貨懸浮生長中，都通常遵循四個(gè)特征性階段：遲滯期,、對數(shù)或指數(shù)期,、靜止或平臺期及衰退期。